上周我们分析过一篇有关lncRNA的高分文章：关于lncRNA，科研大神们是怎么做的？

在该文章中，科研大神们研究了LncRNA HOXC-AS3与胃癌的联系，发现HOXC-AS3可能在转录水平上起主要调节作用，并经过试验验证HOXC-AS3通过转录之后调控其他基因来参与胃癌的发生，该研究内容较多，也较深入，那今天我们来看另外一篇高分文章，与之前文章的研究思路作比较，总结关于LncRNA的研究思路可以有哪些。

文章：H19 Induces Abdominal Aortic Aneurysm Development and Progression

期刊：《Circulation》

影响因子：18.88

该文章研究的是lncRNA H19与腹主动脉瘤（AAA）发展的联系，我们来看文章的具体内容：

1. 作者建立了两种动物模型，首先在小鼠模型中进行RNA测序，发现lncRNA H19是AAA组织中上调的转录因子之一；

但在PPE输注的另外的小鼠模型中发现了三个有关的上调LncRNA，但是因为lncRNA H19在小鼠和人类样本中是最显著上调的IncRNA，故选它作为研究对象；

之后研究人员设置了体内敲除lncRNA H19实验以及原位杂交实验，结果表明，H19表达在扩张的主动脉组织中的内侧SMC中显著升高；

2. 研究人员又采用动态活细胞成像系统观察到H19的过度表达导致SMCs细胞凋亡增强和增殖率降低。敲除H19抑制SMC凋亡，但未观察到对增殖率有显著影响，这些数据表明lncRNA H19可调节平滑肌细胞功能；

3. 大量研究表明H19可能作为miR-675的贮存器发挥作用，用lncRNA H19野生型载体（H19 wt）或lncRNA H19突变株转染培养的hAoSMC，来评估miR675在H19介导的SMCs效应中的作用，结果表明在AAA发育过程中，H19对SMC的影响与miR675无关；

4. 接下来作者进行了分析和推测，提出H19可能通过改变转录因子调节SMC细胞凋亡，并确定了几个转录因子；

设计RNA阵列来研究H19过表达和敲除后SMC中转录因子表达的变化。结果表明HIF1是唯一的差异调节因子；之后使用siRNA诱导HIF1α的抑制，证实HIF1α介导H19的作用；

为了进一步探讨HIF1α触发SMC凋亡的机制，作者进行了HIF1α过表达，或者通过AAA相关因子AngII诱导其表达，由此引出与促凋亡蛋白Bcl-2启动子区相关的p53结合位点；

5. 用qRT-PCR评估小鼠和人AAA样品中HIF1α和凋亡相关基因的表达，结果表明H19，HIF1α和BAX均表达上调，而抗凋亡蛋白BCL2在鼠AngII和PPE模型以及人主动脉瘤中均显著下调，H19和HIF1α在两种小鼠模型中诱导一致，而已知HIF1α下游靶标的特定变化在不同的模型中不一致，说明这些变化可能与模型相关而不是呈HIF1α依赖性；

6. 之后作者通过PPE灌注在野生型（WT）或Ldlr-/-Yucatan迷你猪中诱导AAA，与假手术组相比，H19的表达显著上调，同时PPE诱导的AAA中HIF1α的表达增强；

7. 之后研究人员利用原位杂交（ISH）和邻近连接测定（PLA）来评估H19和HIF1α之间的物理相互作用，结果表明AngII治疗以及H19的过表达显著增强了H19和HIF1（主要在细胞质中）之间的相互作用；

8. 作者又设计了生物素标记的ISH探针，靶向HIF1α启动子区域，在细胞核中证实了Sp1和H19之间的相互作用模式。然后使用在启动子区域含有HIF1α wt或Sp1结合位点突变体的荧光素酶报告基因测定法。观察发现Sp1和H19过表达的组合处理显著增加了转录活性，这表明H19可促进Sp1与HIF1α启动子区域的结合；

9. 此外，作者使用LongTarget工具预测H19-HIF1结合模式，这些数据表明，H19通过招募Sp1启动子区域增强HIF1γ转录。

现在我们来总结下，上篇文章中，作者首先采取生信分析方法在胃癌表达谱中确定一个高表达的LncRNA，接下来验证，验证完后探讨其机制，重点就在这里，上篇文章中，作者先做推测该LncRNA在顺式元件中起作用，然后做实验证实该推测判断错误，说明该LncRNA可能在转录水平上起主要调节作用，之后又深入做实验证实了该结论；

而在本文中，作者建立了两个不同的诱导动物模型，这就成为了该文章的加分项之一，然后作者确定了要研究的LncRNA之后，也进行了细胞实验验证其功能，之后推测其作用机制。

这篇文章的重点就在这里，经过分析确定了有可能与之相关的miRNA，但实验证明该LncRNA对肿瘤的影响与该miRNA并无联系，于是作者进行了分析和推测，提出H19可能通过改变转录因子来调节SMC细胞凋亡，之后设置实验证实H19促进HIF1α的转录，并且可以调控其翻译后在细胞内的定位，如下图所示：

所以，上篇文章中，是关于lncRNA在转录水平上的调控作用，而该篇文章中是关于lncRNA促进HIF1α的转录，且在翻译后进行调控，那你学习到了吗？

看来，想要发高分文章，普通的套路是不行的，思路才是最重要的，你有什么想法，在留言区与小编一起讨论吧~

 参考文献：

 A, Busch, Jin H, Chernogubova E, Pelisek J, Karlsson J, Sennblad B, Liu S, Lao S, Hofmann P, Bäcklund A, Eken SM, Roy J, Eriksson P, Dacken B, Ramanujam D, Dueck A, Engelhardt S, Boon RA, Eckstein HH, Spin JM, Tsao PS, and Maegdefessel L. 2018. 'H19 Induces Abdominal Aortic Aneurysm Development and Progression.%A Li DY', Circulation, 138: 1551-68. 

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