TELL-Seq 技术（转座酶连接长读长测序，Transposase Enzyme Linked Long-read Sequencing）是一种基于单管（图3，最右侧）的关联读长方法，其利用高浓度缓冲液体系，在 PCR 管的开放反应空间中实现高效的 DNA 分区与共条形码标记。该技术仅需 3 小时 即可完成关联读长文库构建，输入样本量低至 0.1–5 ng，且无需专用实验室设备（实验流程见图 1）。后续 TELL-Seq 文库可在短读长测序平台（如 Illumina）上进行测序，相比长读长测序方案，该平台具有更高的碱基识别准确性、更高的测序通量以及更低的成本优势。

图1

什么是关联读长

Linked reads（关联读长）是带有 ** 唯一分子标签（条形码）** 的短读长序列，该标签可反映长链 DNA 分子的分区化片段化过程。在高通量测序水平下，数百万条高分子量（HMW）DNA 分子可同时被虚拟或物理分区，并分别片段化，从而实现其子片段的独立共条形码标记。测序完成后，利用条形码将各子片段 “关联” 起来，进而重构出原始的高分子量 DNA 分子（图 2）。该技术可借助 Illumina® 等平台的短读长测序数据，获得长度可达 200–300 kb 的长片段信息。

图2

关联读长的分类

根据 DNA 物理或虚拟分区的程度，关联读长（linked‑read）方法可分为三类：基于微滴（油包水）的方法、基于微孔（物理隔离）的方法和单管法。

基于微滴的方法利用乳化油生成微米级微滴，将 DNA 分隔至每个微滴约 1–20 个 DNA 分子的文库中（图 3，左）。基于微孔的方法通过在 384 孔板中进行超高倍稀释，将 DNA 分隔至每个微孔数千个分子的文库中（图 3，中）。单管法则依靠微米级磁珠表面，在每个微珠上捕获约 1–8 个 DNA 分子，并可在 PCR 管的开放体系中完成数百万个独立的共条形码标记反应（图 3，右）。

图3

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