总结昨天胶回收失败的一天，想好点样的顺序，开始实验之前一定要仔细研究胶回收试剂盒说明书，准备好试验过程中要用到的东西，做到心中有数。停止怀疑自己是实验成功的关键。
Steps：
⒈按单酶切体系点样（用PCR管），用枪吸打混匀，短暂离心将反应液收集至管底，于37℃水浴2h；
⒉用高保真酶扩增目的基因的上臂UP，点好样，用枪吸打混匀，短暂离心数秒，跑PCR；
⒊制胶：
80mL1%琼脂糖凝胶电泳（0.8g Agarose+80mLTAE电泳缓冲液→Goldview Ⅱ型核酸染料）-- 用1.5mm和2mm梳子；
⒋点样：
6×DNA Loading Buffer，20μL体系6×DNA Loading Buffer加4μL；
⒌Trans2K® DNA Marker和 5kMarker点5μL
⒍记好自己的点样顺序
⒎凝胶成像系统拍照（Image Lab Software）
点击打开Image Lab → 点击新建实验协议 → 点击选择凝胶类型（核酸凝胶-Ethidium Bromide）→ 点击放置凝胶 → 打开凝胶放置槽放入凝胶 → 点击运行实验协议 → 滤光片位置选择自动默认 → 确认后开始检测，弹出图片 → 在分析工具箱选择需要调整的项目 → 在文件栏目下选择导出--导出以便发布 → 点击导出（600dpi） → 选择保存类型JPJ →保存后关闭软件及凝胶成像仪
⒏切胶--切胶器（TRANS UV）
利用全式金胶回收试剂盒（EasyPure Quick Gel Extraction Kit）（离心柱吸附）
原理：
利用异硫氰酸胍法溶胶，利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA，适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，操作简单快速。纯化得到的DNA可用于酶切、连接、克隆、测序等多种操作。
Prepare：
使用前加不同体积无水乙醇到WB中；
开始试验前打开55℃水浴锅，ddH2O于65℃水浴锅预热；
加异丙醇（为增加DNA回收量，按1:1比例，即凝胶重为100mg，加入100μL异丙醇）
所有离心均在室温下进行。
操作步骤：
切胶（用切胶器，速度要快）→ 称重 → 加3倍体积的GSB溶液→ 于55℃水浴溶胶10min → 枪转移至离心柱中静置1min →10,000×g离心1min，弃流出液 → 加650μL溶液WB，10,000 ×g离心1min，弃流出液 → 空甩1-2min，去除残留的WB → 将离心柱置于一干净的离心管中，开盖静置1min → 在柱的中央加入40μL预热的ddH2O → 室温静置1min → 10,000×g离心1min洗脱DNA两次 → 将洗脱出的DNA于-20℃保存 → 吸取5μL测浓度
注意事项：
⑴ 为了保证回收效果，电泳时使用新鲜电泳缓冲液。
⑵ 切胶时，胶块尽量小；溶胶时，确保胶块完全融化。
⑶ 为避免紫外照射对DNA造成损伤，影响下游的实验（如克隆，连接），紫外照射时间尽量短。
Mini point：超微量分光光度计（dsDNA浓度测定）
1μLddH2O Blank校正
DNA纯度：OD260/OD280=1.8-2.0
