1. 进入NCBI BLAST NCBI_BLAST_tool.png 2. 进入Primer-BLAST Primer-BLAST.png 3. 输入模板序列,根据要求:是否跨外显子设计引物,产物长度,退火温度,GC含量等设置参数。 输入目的片段以及产物大小.png 输入参考基因组_转录组_错配.png 设定GC含量.png 新窗口显示结果.png 4. 耐心等待引物设计结果 耐心等待结果.png 5. 通常选择前3对进行验证 引物设计结果.png