背景知识

转录组

广义上是指组织或细胞在一定功能状态下所有转录产物的集合,狭义上是指所有mRNA的集合。其是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带。

转录组的特点

具有时空特异性
相对于DNA,RNA更容易降解
表达丰度范围广
mRNA通常有前体,需要剪切和修饰

CDS、cDNA、外显子

CDS:编码序列的缩写,从起始密码子到终止密码子的所有序列
cDNA:与mRNA链互补的单链DNA,由mRNA在逆转录酶的作用下反转录后形成
外显子:断裂基因中的编码序列(mRNA在进行剪切时,相对于内含子,没有被剪切去掉的序列)

为什么有转录组测序

测定基因的表达量有许多种方式,比如基因芯片、qPCR等。
转录组测序在芯片基础上,更加精准。芯片就像模拟信号,而转录组测序就是数字信号,他能检测到更多的差异表达基因(即动态范围大)

测序实质

RNA反转录成cDNA,测的就是cDNA,通过检测的cDNA表达量,可以推断出RNA的数量。
某个基因cDNA片段数量比较多,那么也就意味着原始RNA的含量也很高,即该基因表达量高。
但是实际操作中,怎么计数,怎么比较才是分析的精髓

解决的问题

①不同处理条件对分子机制的影响;
②研究发育过程的转录动态重编码过程;
③研究动植物与微生物的互作;
④不同样品间寻找差异表达基因;
⑤转录组定位性状基因;
⑥获得物种的转录本序列;
⑦辅助基因组组装和注释,得到更完善的参考序列

一般流程

质控 - 比对 - 估算表达量 - 表达量比较
比对可以比对参考基因组或参考转录组

优点

结合高通量测序,快速准确地识别转录本,进行表达定量

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