（一）无菌操作
细胞在体外生长，其生存环境发生了很大变化。首先，体外培养细胞缺乏抗感染能力，故应无菌操作，以最大限度地防止微生物污染。培养所用的一切物品、液体均应无菌。操作前最好先列出所需用品，培养液等须37°C预热或室温平衡，所有物品准备好后再开始操作，
避免往返拿取用品。
（二）细胞培养操作区域消毒
无菌间或超净台的操作区域使用前后需经紫外灯照射20-30min 进行消毒。用紫外灯照射期间，在台面上勿放置培养细胞和培养用液等。所有进入操作区域的物品需经75％乙醇擦拭消毒。工作前后台面均需经75％乙醇擦拭消霉， 特别是有液体溢出时，需立即擦拭。
（三）洗手和着装
原则上与外科手术相同。进入无菌间要更换专用无菌衣，戴口罩和帽子。双手最好戴乳胶手套， 然后用75％乙醇喷洒消毒或用乙醇棉球擦拭消毒。
（四）火焰消毒
在开放式工作台上进行培养或其他无菌操作时，首先要点燃酒精灯。之后的一切操作， 如安装吸管帽、打开或封闭瓶口等，
都需要在火焰近处，经烧灼消毒管口或瓶口后进行。金属器械不能在火焰中烧灼时间过长，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，
防止残留在吸管中的培养液烧焦，以致接下来使用该吸管时将有害物质带入培养液。在无菌操作台或超净工作台中操作时，火焰消毒是不必要的， 甚至是有害的。
（五）实验操作
进行细胞培养操作时，动作要稳、准，动作幅度尽可能小。工作台面上，实用物品要摆放合理，
右手用的东西放在右侧，左手用的东西放在左侧。酒精灯放在中央。打开的试剂瓶，尽可能斜放。而打开培养瓶则应平放。工作要有顺序，尽量缩短各种液体、细胞暴露的时间。吸取不同液体、处理不同的细胞要用不同的吸管，避免液体间、细胞间的交叉污染。
