2024-11-27-激光共聚焦光路选择

1、定位细胞核:DAPI

DAPI,是一种能与DNA结合的荧光染料,细胞标记效率高。常用于死细胞细胞核标记。

常用激发波长405 nm,最大发射波长454 nm,呈现蓝光。

DAPI未结合DNA时最大吸收波长340 nm,最大发射波长488 nm。DAPI与DNA结合后,最大吸收波长为358 nm,最大发射波长为461nm,呈现蓝光。

2、光敏剂TCPP,Tetrakis (4-carboxyphenyl) porphyrin (四(4-羧基苯基)卟吩; TCPP)


(1)TCPP卟啉有荧光。许多卟啉和金属卟啉在室温,溶液状态下既能发射荧光,又能发射磷光。卟啉可作为荧光探针。实验中可用直接扫描600-800 nm荧光值,也可根据材料情况给与激发光后收集特定的荧光。

卟啉的发射波长大约在645-680 nm之间,这个波长范围在红光和近红外线的范围之内。当分子从激发态退回到基态时,会释放能量,产生发光。

TCPP在紫外-可见光区有较强的吸收峰,吸收峰波长为414 nm,属于Soret带。同时,TCPP在280 nm处有一个明显的吸收峰,这是其Q带吸收峰。

(2)卟啉自聚集,实验中需注意检测其在PBS、培基和保存溶剂中的粒子直径分布。

3、Cy3

Cy3耦联基团激发光最大波长550 nm,最强发射光为570 nm。呈现红光。

可使用TRITC样滤波片。Cy3在氩光灯(514 nm或528 nm)下可被激发50%光强,在氦氖灯(543 nm)或汞灯(546 nm)下约75%。

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