板块“与实验结缘”代号“Destiny”（命运）主要想与大家聊聊，科研实验中的那些事儿。
密度梯度离心是一种简单、快速分离细胞的方法，原理是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
大家搜密度梯度离心介质时候，会发现有两种产品：Ficoll还有Percoll。名字这么相似，作用一样吗？他俩有什么区别呢？我应该怎么选择呢？
先别头大，小编先用一句话，形容一下这两个试剂：Ficoll是多能的，但Percoll是全能的！下面详细说说这两个试剂。
Ficoll
Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）最常用的方法。
PBMC包括淋巴细胞和单核细胞（图1），由于其体积、形状和比重与其他细胞不同，可以使用密度在 1.077±0.001 g/ml 之间的Ficoll溶液作为密度梯度离心介质将它与其他细胞分离开。
使用Ficoll溶液将血液离心分层后，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集，血浆（Plasma）和血小板由于密度较低, 故悬浮于分层液的上部；PBMC 密度稍低于分层液，故位于分层液界面上形成白膜层；红细胞（RBCs）与粒细胞（Granulocytes）由于密度较大, 故沉于分层液的底部（图2右）。
Ficoll是蔗糖的多聚体，一般实验室内常用的是Ficoll-Paque，不同型号及对应的应用方向请见下表：
需要注意以下几点
1、 人的PBMC分离，可以选择Ficoll-Paque Plus（1.077），入股不亏；但是小鼠PBMC分离建议购买Ficoll-Paque PREMIUM（1.084）哦，因为他们密度不一样。
2、 虽然网络上密度梯度离心sop满天飞，但是使用的时候，还是希望大家多多翻阅文献、认真阅读试剂说明书，进一步摸索对应实验的最佳使用条件。不要想当然，因为你会发现当你使用Ficoll 4˚C离心人外周血时，获得的PBMC里有很多红细胞污染（！！！ 注意离心温度在 18-20℃，温度较低时，Ficoll的密度较大，红细胞凝集较少，粒细胞和红细胞会因为被阻止进入Ficoll层而导致污染）。
Percoll
Percoll由聚乙烯吡咯烷酮(PVP)包被的硅胶颗粒组成，它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点，已得到广泛引用。
Percoll Plus是共价偶联烷硅涂层硅胶，性质更加稳定，内毒素含量较低，有法规文件支持，可以用于临床研究；Percoll 仅能用于科研。
为什么说Percoll是全能的呢？因为它的应用范围较广，不仅仅适于分离不同密度的细胞，还可分离亚细胞器和病毒，可实现从1.02-1.3 g/ml范围内的密度梯度离心分离（Ficoll仅有3个固定密度），下表中有一些细胞浮力密度可供参考。
下面提升难度，需要你转动自己聪明的小脑袋！既然说到Percoll可以有多个密度，那么我们应该怎么配置Percoll溶液呢？
百分比稀释法
首先配制母液（SIP），密度为1.123g/ml，体积配比为1.5M NaCl（或者2.5M蔗糖）：Percoll原液=1 : 9。再按照百分比使用0.15M的NaCl（或者0.25M的蔗糖）进行配置。计算公式为：
一步稀释法
在量筒中加入1/10最终稀释液体积的1.5M NaCl（或2.5M 蔗糖），之后按照下方公式计算所需Percoll原液体积，最后使用蒸馏水补齐剩余体积（=终体积 - 1.5M NaCl 体积 - Percoll原液体积）。
童鞋们，你们选对试剂了吗？
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