LAMP 反应原理

  1. 在60-65℃条件下,双链DNA处于解旋与结合的不稳态,其中上游内引物 FIP中的 F2序列区段首先与模板目标区段的单链 DNA中的 F2C结合,在Bst DNA聚合酶的作用下自 F2的3’ 末端延伸启动链置换DNA合成。
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  1. 外引物 F3则与模板 F3c结合并延伸,置换出由 FIP链接的互补单链 DNA,此单链的 F1c与 F1区段互补结构,可通过自我碱基配对形成环状结构。
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  1. 以(2)中合成的5‘ 端有茎环状结构的单联 DNA为模板,下游内引物 BIP的B2序列区段与单链DNA模板的B2c结合,在Bst DNA聚合酶的作用下自 B2的3’ 末端延伸启动链置换DNA合成。
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  1. 外引物 B3则与模板 B3c结合并延伸,置换出由 BIP链接的互补单链 DNA,此单链的 F1与 F1c区段互补,B1c与 B1区段互补,形成哑铃状结构的单链DNA。
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  1. 哑铃状结构以 3’ 末端的F1区段为起点,以自身为模板进行 DNA合成。由此,哑铃状结构转变为茎环状结构,LAMP扩增进入第二阶段。
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  1. 内引物 FIP与(5)步形成茎环状结构的处于局部单链状态的茎环 F2c区段结合启动 DNA链置换合成,所合成并解离得到的单链 DNA部分也可以形成环状结构。
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  1. 随后(6)步形成的环状结构以3’末端的B1区段为起点, 以自身为模板,进行DNA合成延伸及链置换反应。形成1个哑铃状结构的单链 DNA和1个新茎环状结构的 DNA。
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  1. 下游内引物 BIP上的 B2可与(7)步形成的2个茎环状结构的局部处于单链状态的茎环B2c区段结合 DNA链置换合成。
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  1. 类似的反应将无限重复。
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