HiScript®III Reverse Transcriptase

更高效的第三代反转录酶（逆转录酶），更高的反应温度有助于打开RNA的二级结构，更高的反应效率，质量同Superscript III反转录酶。

广泛的模板兼容性：可兼容动物、植物、细胞、病毒等多种模板

超强的杂质耐受度：对于常见杂质（乙醇、异丙醇、水平衡酚、腐殖酸）均具有超强的耐受度

卓越的逆转录效率：逆转率效率等同于国际著名公司的Superscript III反转录酶，承诺质量完全一致，可以直接替代。

HiScript®III Reverse Transcriptase对于复杂二级结构的RNA，推荐的反应温度为50~55℃，对于存在复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60~65℃，避免RNA复杂二级结构对cDNA合成的抑制，可有效合成高质量的cDNA。本产品可以合成长达12Kbp的cDNA，除此之外，本产品仍具有优越的持续合成能力和超强的杂质耐受度。

附件：实验操作步骤

第一链cDNA合成

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分使用量

Rnase free ddH2O to                                  12μL

Oligo(dT)18 (50μM)                                      1μL

Or  Random Primers (50 μM)                      1μL

Or Gene  Specific Primers (2μM)                  1μL

Total  RNA: 1ng -5 μg或mRNA:1ng-500 ng

dNTP mix                                                        1μL

65℃加热5 min，迅速置于室温2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20μL体系）

组分使用量

上一步的反应液                    12μL

5× HiScript Buffer                  4μL

DTT                                        2μL

HiScript®III RT(200 U/μL)      1μL

RNase inhibitor (40 U/μL)        1μL

3. 逆转录程序设置

温度时间

25℃(可选)            5 min

50℃-55℃      15-50min

85℃(可选)            5 min

【注】：

1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo(dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

2）逆转录温度：推荐使用50-55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60-65℃。

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活，对于后续需要进行其他实验的，比如二链合成等，此步骤需要省略。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。