可用于检测多种样本中的大鼠 IgG2c，包括大鼠血清、血浆、腹水、细胞培养上清等。其中，血清是最常用的样本类型。收集血清时，一般通过静脉穿刺或心脏穿刺获取全血，然后在室温下静置一段时间，使血液自然凝固，再离心（通常为 1000 - 3000rpm，离心 10 - 15 分钟），收集上清液即血清。
样本保存：如果样本不能立即检测，需要进行妥善保存。血清或血浆样本可保存在 - 20℃或 - 80℃。在冷冻保存前，最好将样本分装，以避免反复冻融，因为这可能会导致抗体活性降低或蛋白变性。在使用前，将样本解冻，解冻后的样本应轻轻混匀，避免剧烈振荡，防止抗体结构受损。
样本预处理（如有需要）：对于一些含有杂质或可能干扰检测的样本，如腹水或细胞培养上清，可能需要进行预处理。例如，腹水样本可能含有细胞碎片、脂肪等杂质，可以通过离心（较高转速，如 5000 - 10000rpm，离心 5 - 10 分钟）去除这些杂质，然后取上清液进行检测。如果样本中存在可能与检测抗体发生非特异性结合的物质，如某些高浓度的蛋白，可以通过透析或使用蛋白沉淀试剂等方法进行处理。
操作流程步骤试剂准备在开始实验前，将试剂盒从冰箱中取出，放置在室温下平衡一段时间（通常为 30 分钟左右），让试剂温度恢复到室温，以确保试剂的性能。同时，检查试剂盒内的各种试剂是否齐全，包括检测抗体、酶标二抗、标准品、底物、缓冲液等。
根据实验所需的样本数量和标准曲线的点数，按照试剂盒说明书的要求，用适当的缓冲液（如磷酸盐缓冲液，PBS）稀释标准品和检测抗体。例如，标准品可能需要进行系列稀释，以制备具有不同浓度梯度的标准曲线。
包被将适量的捕获抗体（针对大鼠 IgG2c）用包被缓冲液（通常是碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液，pH 9.6 左右）稀释后，加入到酶标板的孔中。每孔加入的体积根据酶标板的规格和试剂盒说明书确定，一般为 100 - 200μL。
加入封闭液（如牛血清白蛋白，BSA 溶液，浓度一般为 1% - 3%）到酶标板孔中，每孔加入量为 200 - 300μL。将酶标板在室温或 37℃下孵育 1 - 2 小时，以封闭酶标板孔壁上未被捕获抗体占据的位点，防止后续步骤中的非特异性吸附。
加样封闭结束后，再次用洗涤缓冲液洗涤酶标板孔 3 - 5 次。然后将准备好的样本和标准品分别加入到酶标板的不同孔中，每个样本和标准品设复孔以提高检测准确性。样本和标准品的加入体积根据实验设计和试剂盒说明书确定，一般为 100 - 200μL。
将酶标板放入恒温箱中，在 37℃下孵育 1 - 2 小时，使样本中的大鼠 IgG2c 与包被的捕获抗体充分结合。
洗涤孵育完成后，用洗涤缓冲液对酶标板孔进行洗涤，洗涤方法同前面步骤，一般洗涤 3 - 5 次，以去除未结合的 IgG2c 和其他杂质。
加酶标二抗按照试剂盒说明书的要求，用适当的缓冲液稀释酶标二抗（一般是抗大鼠 IgG 的酶标记抗体）。将稀释后的酶标二抗加入到酶标板孔中，每孔加入体积为 100 - 200μL。
将酶标板放入恒温箱中，在 37℃下孵育 30 - 60 分钟，使酶标二抗与已结合在捕获抗体上的大鼠 IgG2c 结合。然后再次用洗涤缓冲液洗涤酶标板孔 3 - 5 次，以去除未结合的二抗。
终止反应与检测当显色反应达到适当程度（如颜色变化明显，但未过度显色）时，加入终止液（如硫酸溶液）终止反应。每孔加入终止液的体积根据试剂盒说明书确定，一般为 50 - 100μL。终止反应后，颜色会发生变化（如 TMB 显色反应从蓝色变为黄色）。
使用酶标仪在合适的波长（如对于 TMB 底物终止后的黄色产物，检测波长为 450nm）下检测各孔的吸光度。根据标准品的吸光度值绘制标准曲线，然后通过标准曲线计算出样本中大鼠 IgG2c 的含量。
