molecular biology

分子生物学实验

DNA/RNA 提取

qPCR(Real-time Quantitative PCR Detecting System)

即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统)聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。PCR又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

凝胶电泳

(Gel electrophoresis)。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子

cDNA 的合成

cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来的基因组DNA不同而且无内含子;相反地,对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上,与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。

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