真空冷冻干燥法（冻干法）是微生物实验室最主流的长期菌种保藏手段之一，广泛适用于沙门氏菌、志贺氏菌、霉菌、放线菌及酵母菌等。
一、 保藏原理
将菌悬液加入保护剂并预冻，在真空环境下使冰直接升华成水蒸气从而除去水分。菌体在低温、干燥、真空的休眠环境中代谢几乎停止，可大幅延缓菌种退化。
核心要点：先冻结，再真空除冰（冰升华），绝非加热烘干。
二、 适用菌种与年限
适用：沙门氏菌、志贺氏菌、芽孢杆菌、霉菌、放线菌、酵母菌等。尤其适合水质检测中无芽孢致病菌（沙门、志贺）的保存。
不适用：极少数对冻干损伤极度敏感的菌株。
保藏年限：5～10年，管理良好可达15年以上；室温避光存放即可，无需低温设备。
三、 操作步骤
保护剂配制：常用无菌脱脂牛奶、蔗糖、海藻糖等（作用：减少冰晶对细胞膜损伤，干燥后包裹菌体）。
制备菌悬液：取对数生长期的新鲜菌种，混入无菌保护剂，分装至安瓿瓶。
预冻：快速降温至 -40℃～-50℃，使菌悬液完全冻结成固体。
真空干燥：使用冻干机抽真空，使冰直接升华除水，样品最终呈干燥菌粉状。
真空熔封：在真空状态下火焰熔封管口。贴好标签（注明菌种编号、名称、保藏日期、传代次数），避光室温保存。
菌种复苏：无菌敲开安瓿瓶，加入无菌水复溶后转接适宜培养基。复苏后必须进行纯度及生化特性核验。
四、 优缺点
优点：保藏周期长，性状稳定变异低；常温避光储存，无需液氮或超低温冰箱；体积小，便于邮寄和转运标准菌株；适用范围极广。
缺点：设备投入大（冻干机），自制流程复杂（多数实验室直接外购商品化冻干菌种）；操作工艺要求高，冻干失败会大幅降低存活率；敲开安瓿瓶存在玻璃划伤风险；开封后剩余菌种无法再次保存。
五、 CMA评审高频注意点（合规核心）
外购冻干菌种：必须保留菌种证书、溯源记录、复苏记录及纯度核查记录。
自制冻干管：须具备冻干工艺验证记录及真空密封性检查台账。
储存条件：严格避光、干燥、室温存放，避免高温暴晒。
复苏核验：复苏后必须做纯度核验，确认无杂菌污染且菌种特征未变异。
常见不符合项防范：杜绝缺少菌种溯源证书、复苏无纯度检查、标签信息不全等问题。
