[转载]PhiC31定点插入转基因

PhiC31位点特异性整合酶来源于PhiC31噬菌体,它能介导位于噬菌体自身环状基因组上的attP (attachment-P) 位点,与位于变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)环状基因组上的attB (attachment-B)位点之间发生重组。利用这个原理,研究者最先在细菌、酵母、和哺乳动物细胞中实现了,在PhiC31整合酶的催化下将包含attB位点序列的质粒整合到包含attP位点(或称为docking site,锚定位点)的基因组上。2014年Groth等人首次证明利用PhiC31整合系统,在果蝇细胞或胚胎中也能高效地实现转基因。这对于果蝇转基因技术,无论在效率和应用范围方面都是一次重要的升级。PhiC31定点插入相对于P因子随机插入转基因技术具有几个优势:1. 可选择转基因插入的位置;2. 可以将更大的片段整合到果蝇基因组;3. Recombineering,改造后的系统更便于研究。

果蝇中的PhiC31整合系统由3部分构成:(1) PhiC31整合酶;(2) attP果蝇品系;(3) 带有attB序列的注射质粒。PhiC31整合酶可通过注射外源PhiC31整合酶mRNA来提供,或者通过转基因将整合酶基因整合到果蝇基因组上,从而让胚胎自身表达提供整合酶。attP果蝇品系是通过转座子转基因技术(比如P因子, piggyBac, Mariner转座子),构建的带有attP位点的果蝇品系。attB质粒除了含attB位点,还被克隆上去了需要整合到基因组上的目的片段。这样,在PhiC31整合酶的催化下,注射质粒上的attB位点与基因组上的attP位点之间发生重组,从而将质粒上的序列完全整合到基因组上,并在序列两端形成新的杂合位点attL和attR(如下图),但attL与attR不能介导新的重组,因此PhiC31介导的转基因过程是不可逆的。

目前,我们最常用的attP果蝇品系是attP2(BDSC# 25710)和attP40(BDSC# 25709),可以快速稳定高效地获得定点插入转基因果蝇。如果客户希望将目的片段整合到特定的attP品系,可以将果蝇寄给我们进行扩增然后进行注射。另外,我们免费提供balancer杂交及鉴定服务(我们有FM7a,Bc/Cyo,TM3/TM6b等balancer品系),如果客户需要与指定的品系进行杂交,可提前将果蝇寄给我们进行扩增。PhiC31定点插入转基因的服务内容及价格请参考下表:

©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 217,185评论 6 503
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 92,652评论 3 393
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 163,524评论 0 353
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 58,339评论 1 293
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 67,387评论 6 391
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 51,287评论 1 301
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 40,130评论 3 418
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 38,985评论 0 275
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,420评论 1 313
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,617评论 3 334
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,779评论 1 348
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,477评论 5 345
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 41,088评论 3 328
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,716评论 0 22
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,857评论 1 269
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 47,876评论 2 370
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,700评论 2 354

推荐阅读更多精彩内容

  • 氨基酸是蛋白质的基本结构单位,参与合成蛋白质的氨基酸有20种,可作为原料在核糖体工厂通过肽键连接形成多肽链,都有密...
    官敏慧阅读 5,667评论 0 7
  • 书名基因社会作者(美)以太·亚奈(ItaiYanai) / (美)马丁·莱凯尔(MartinLercher)译者尹...
    xuwensheng阅读 1,998评论 0 6
  • 今天我和大家分享的是叶嘉莹《唐宋词十七讲》一书的古典文化魅力。 红尘纷扰,日复一日的忙碌生活,倦怠的心灵更需要宁静...
    光明star阅读 812评论 1 3
  • Math:用于数学运算的类 成员变量: public static final double PI;圆周率publ...
    王子也寂寞阅读 233评论 0 0
  • 大家好,我是日记星球297号星宝宝,来自山东东营书宁教育培训学校的刘秀梅,专注青少儿素质教育15年,正在参加孙老师...
    刘妈妈阅读 370评论 1 1