2006年由Devaiah等人在phytochemistry发表。
细胞脂质在细胞结构、代谢和调节中发挥重要作用。
脂质谱(Lipid profiling)是一种靶向代谢组学平台,可以对脂质种类进行全面的分析。通过电喷雾串联质谱分析(ESI-MS/MS),对拟南芥不同组织的甘油酯进行检测,测到了近140种极性甘油酯。包括PA,PE,PI,PA,PS等。使用ESI-MS/MS进行脂质谱分析,只需要将脂质提取物注入质谱仪,因此只需要简单的样品制备。
方法一 Choroform/Methanol method
样品的准备:
1)获取材料(0.5g)
2)取样后,立即转移到含有0.01%的丁基羟基甲苯(BHT)的异丙醇i-PrOH(3ml)中,75℃孵育15min。除了种子需要用玻璃棒压碎,其他不用。
3)加入1.5mlCHCl3以及0.6ml水。将试管摇晃1h,取出提取物。用含有0.01%的BHT的CHCl3:MeOH(2:1),搅动,重复提取5次,每次30min,直到剩下的植物组织全部呈白色,剩下的组织在105℃下过夜加热,称重。称为干重。所有的有机相都搜集到一起。
一般叶子(8-13mg),根(4-8mg)。
4)用1ml的1M KCl,2ml H2O各洗涤一次。去掉上层水。剩下的有机溶剂在氮气下蒸发。脂质提取物溶于1ml的CHCl3(1ml)
5)标曲的制作
注意:进行脂质分析的样品采集速度要快,为了停止脂类活性,需要立即在异丙醇中,75℃浸泡15min.每组需要取5个样。
方法二:Modified Bligh and Dyer(1959)
1.将冷冻的植物材料(-80℃),放入玻璃匀浆器
2.加入3.75ml的MeOH:CHCl3(2:1)
3.加入1mL 1mM EDTA的0.15M 醋酸
4.同质化
5.转移到一个新的有螺旋盖的玻璃管
6.用1.25mL CHCl3漂洗,转移到玻璃管
7.加入1.25mL 0.88%(w/v)KCl
8.涡旋
9.3000rpm离心2min
10.转移脂质层(下层)到一个新的管子,放在-20℃保存
PLD水解脂质生成PA,拟南芥中有12个PLD基因。PLDα1是拟南芥中最丰富的一种磷脂酶