拟南芥中甘油酯的测定

2006年由Devaiah等人在phytochemistry发表。

细胞脂质在细胞结构、代谢和调节中发挥重要作用。

脂质谱(Lipid profiling)是一种靶向代谢组学平台,可以对脂质种类进行全面的分析。通过电喷雾串联质谱分析(ESI-MS/MS),对拟南芥不同组织的甘油酯进行检测,测到了近140种极性甘油酯。包括PA,PE,PI,PA,PS等。使用ESI-MS/MS进行脂质谱分析,只需要将脂质提取物注入质谱仪,因此只需要简单的样品制备。

方法一 Choroform/Methanol method

样品的准备:

1)获取材料(0.5g)

2)取样后,立即转移到含有0.01%的丁基羟基甲苯(BHT)的异丙醇i-PrOH(3ml)中,75℃孵育15min。除了种子需要用玻璃棒压碎,其他不用。

3)加入1.5mlCHCl3以及0.6ml水。将试管摇晃1h,取出提取物。用含有0.01%的BHT的CHCl3:MeOH(2:1),搅动,重复提取5次,每次30min,直到剩下的植物组织全部呈白色,剩下的组织在105℃下过夜加热,称重。称为干重。所有的有机相都搜集到一起。

一般叶子(8-13mg),根(4-8mg)。

4)用1ml的1M KCl,2ml H2O各洗涤一次。去掉上层水。剩下的有机溶剂在氮气下蒸发。脂质提取物溶于1ml的CHCl3(1ml)

5)标曲的制作

注意:进行脂质分析的样品采集速度要快,为了停止脂类活性,需要立即在异丙醇中,75℃浸泡15min.每组需要取5个样。

方法二:Modified Bligh and Dyer(1959)

1.将冷冻的植物材料(-80℃),放入玻璃匀浆器

2.加入3.75ml的MeOH:CHCl3(2:1)

3.加入1mL 1mM EDTA的0.15M 醋酸

4.同质化

5.转移到一个新的有螺旋盖的玻璃管

6.用1.25mL CHCl3漂洗,转移到玻璃管

7.加入1.25mL 0.88%(w/v)KCl

8.涡旋

9.3000rpm离心2min

10.转移脂质层(下层)到一个新的管子,放在-20℃保存

PLD水解脂质生成PA,拟南芥中有12个PLD基因。PLDα1是拟南芥中最丰富的一种磷脂酶

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