还在为类器官状态不稳、实验结果反复而烦恼？掌握这些核心注意事项，轻松告别培养失败！
一、无菌操作：严防死守第一关
· 超净台规范： 使用前30分钟开启紫外+风机，操作区酒精彻底擦拭。移液器、枪头、试剂瓶表面消毒一步不能省！
·“手”护安全： 手套全程佩戴，频繁喷洒75%酒精，避免跨越开放容器上方。
· 试剂分装： 培养基、生长因子等开瓶即分装小份，-20℃/-80℃避光保存，避免反复冻融导致活性下降。
污染是类器官的头号杀手，一次疏忽可能毁掉数周心血！
二、基质胶(Matrigel)操作：冰上速度战
· 全程低温： 提前将Matrigel置于冰盒预冷，枪头、培养板全程冰上操作。
· 快速混匀： 细胞与Matrigel混合需轻柔且迅速，避免胶体过早凝固成团。
· 精准点胶： 混合液滴入预温培养板中央，轻晃铺匀后立即37℃静置15-30分钟成胶。
操作拖延将导致胶体凝结不均，影响类器官三维生长结构！
三、培养基管理：成分新鲜为王道
· 现配现用： 含生长因子、B27等添加物的完全培养基，建议每次更换时新鲜配制。
· 更换频率： 初期每2-3天换液，后期根据代谢速度调整（观察pH值变黄快慢）。
· 轻柔操作： 吸弃旧液时避免触碰胶滴，沿壁缓慢加入预热新培养基。
陈旧培养基积累代谢废物，将直接抑制类器官增殖活力！
四、培养环境：稳定就是生命线
· 恒温恒湿： 37℃培养箱，湿度≥95%严防培养液蒸发（建议使用无菌水盘）。
· 气体平衡： 常规5% CO₂环境，特殊类器官（如肠道）需额外10% O₂调控。
· 拒绝震动： 培养箱远离开关门频繁区域，搬动时轻拿轻放。
温度波动或CO₂浓度不稳，将直接扰乱细胞代谢与基因表达！
五、日常监测：早发现早干预
· 形态观察： 每日镜下查看，健康类器官边缘清晰、结构紧实（如图）。出现空泡、碎片化立即排查。
· 污染筛查： 定期镜下观察有无真菌菌丝、细菌游动，培养基浑浊需即刻隔离处理。
· 记录追踪： 详细记录传代时间、形态变化、试剂批次，便于问题溯源。
类器官状态变化是培养系统的“晴雨表”，密切监测才能及时止损！
六、传代与冻存：把握关键时机
· 传代节点： 类器官生长至基质胶边缘（约80%融合度）时进行，过度生长将导致中心坏死。
· 消化控制： 使用专用的类器官消化液(GUTP-R004)，严格计时，过度消化将破坏细胞极性。
· 冻存保护： 使用高浓度DMSO冻存液，程序降温后转入液氮，避免反复冻融。
传代过早产量低，过晚活性差；冻存不规范将导致复苏率暴跌！
核心要义：无菌是底线，环境是基础，细节定成败！
每一次规范操作，都在为你的“微型器官”注入生命力。收藏这份避坑指南，培养效率翻倍不是梦！
