生物实验原理整理

1.IP与co-IP:(用于研究蛋白质相互作用。。)
免疫沉淀和免疫共沉淀都是基于抗原抗体结合的特性来实现的。
IP:在琼脂珠上插满一种蛋白A/G,这种蛋白能够稳定的结合抗体的FC部(Y型的岔口处)。再接着抗体可以和特异的抗原结合。实验中,只要往含有目的抗原的溶液里加入对应的抗体,再通过离心,(珠子带着结合的抗原抗体在下面),就可以纯化得到自己的目的抗原。
co-ip:与IP唯一不同的是,IP的目的成为初级靶分子,co-ip的对象是次级靶分子,即 抗原X作用结合着的Y。


IP-rule.png
CO-IP-SHOW.png

图片来自文献
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2.LRA:luciferase reporter assay,荧光素酶报告实验。(用于测转录因子活性,作用强度。。)
利用荧光素酶催化荧光素发出荧光的特性。
实验上,就是构建一个报告基因的质粒,在靶启动子特定片段插到荧光素酶表达基因的前面,如果待测转录因子能够激活靶启动子,荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。再加入特定的荧光素酶反应底物,测荧光强度即可判断转录因子有无作用和作用强度了~


LAR_show.png

图片来自文献
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3.流式细胞仪检测细胞凋亡的原理:


flow_pi_Annexin V.png

4.基因编辑-crispr/cas9
crispr(clustered regularly interspaced short Palindromic repeats)一段规律/有间隔/短的/群集性/重复/回文 序列
cas9 = 一把能够剪短DNA双链的剪刀
sgRNA = 指引者
PAM motif = 身份证
综上:sgRNA带着cas9去特定切除持有身份证的靶向序列

5.生物膜干扰实验(分子结合)


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6.趋化性实验
趋化性是指,诱导细胞向趋化因子浓度高的方向移动。


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