磷壁酸，强抗原性。G+的表面抗原，用于血清型分型
G-细胞壁：肽聚糖、脂蛋白、外膜（脂质双层-细胞膜成分，上有性菌毛、噬菌体受体）、类脂A、多糖。
脂多糖(LPS)：由<u>类脂A</u>、核心多糖、特异性多糖组成。强烈毒性，LPS在菌体溶解时才释放，故称为<u>细菌内毒素</u>。

• 类脂A耐热，内毒素的<u>主要成分</u>和毒性部位。无种属特异性不同细菌内毒素毒性作用相似。
• 核心多糖：“属特异性”。
• 特异性多糖：具抗原性，是G-的“菌体抗原”（O抗原），“种特异性”。

细胞膜（胞质膜）在G-称为内膜。

1. 物质纳泄
2. 生物合成
3. 呼吸作用（有细胞色素和脱氢酶，氧化磷酸化）
4. 形成中介体（多见于G+，扩大细菌膜面积，有真核细胞线粒体作用）

细胞质

1. 核糖体（多聚核糖体：蛋白质合成场所）
2. 核质-拟核（细胞核功能）
3. 质粒（性菌毛-F因子，耐药性-R因子，大肠菌素-col因子）
4. 胞质颗粒-暂时贮存的营养物质

异染颗粒：（<u>RNA</u>、<u>多偏磷酸盐</u>）嗜碱性，美兰染色呈紫色。多见于白喉、鼠疫、结核杆菌。白喉杆菌的异染颗粒多在菌体的一端或两端（<u>极体</u>→细菌鉴别）

特殊结构

1. 荚膜（机体内培养基中能形成）最重要抗吞噬作用，构成毒力的因素之一。具抗原性（鉴别分型）抗溶菌酶、抗补体、抗干燥，作为营养物质。
2. 鞭毛（蛋白性丝状物）“H”抗原。
3. 菌毛（G-多数）鞭毛比菌毛更为细短直硬多。

• 普通菌毛：数百条，是黏附器官，构成感染的<u>必要因素</u>
• 性菌毛：黏附雌性细菌，传递遗传物质。（大肠杆菌&肠道菌的<u>雄性菌株</u>）

芽孢（细胞内形成，常称为<u>内芽孢</u>），休眠状态，种的特征。<u>需氧和厌氧芽孢杆菌2属</u>。100℃水中耐受<u>2h</u>，70%乙醇20年。
芽孢→炭疽杆菌、肉毒杆菌、气性坏疽病原菌、破伤风杆菌！
高压蒸汽灭菌技术是杀死芽孢最有效手段，杀死芽孢应作为灭菌的指征，不然就焚烧。

细菌L型：失去细胞壁（细胞壁<u>缺陷型</u>）是细菌的通性。外界因素作用的过程称为“诱导”，（<u>诱导剂概念</u>-外界因素）L型需高渗透压培养基，3%~5%氯化钠维持。
L型菌落的3种类型

1. L型 <u>油煎蛋样</u>、周边透明颗粒状
2. G型 透明颗粒状
3. F型 菌落似L型-油煎蛋、周边为透明性<u>丝状</u>

L型引起<u>慢性</u>和<u>反复发作性感染</u>，主要致病物质→毒素，内毒素产量减少。

细菌的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子（自身不能合成的有机物质-维生素、氨基酸、脂类、嘌呤、嘧啶）

• 自养菌：光能营养菌&化能营养菌
• 异养菌：腐生菌&<u>寄生菌(大部分病原菌是)</u>

营养物质进入菌体的方式

1. 易化扩散 又称<u>简单扩散</u>
2. 主动运转 又称<u>主动吸收</u>（逆浓度梯度、由<u>透性酶</u>完成）
3. 基团移位 糖的吸收必须磷酸化，糖类与磷酸烯醇丙酮酸盐结合

生长繁殖

1. 充足的营养 原料&能量
2. 温度：极限-7~90℃

• 嗜冷菌 10~20℃
• 嗜温菌 20~40℃、病原菌都是嗜温菌-最适37℃
• 嗜热菌 56~60℃

3. 酸碱度：pH 7.2~7.6
4. 气体环境

• 专性需氧菌
• 专性厌氧菌
• 兼性厌氧菌 大多数病原菌（脑膜炎双球菌 CO2，5%~10%）

代时:分裂倍增的必需时间。<u>20~30mins</u>
生长繁殖分为四期

1. 迟缓期
2. 对数期（性状最好）
3. 稳定期
4. 衰亡期

• 细菌的<u>分解代谢</u>：多糖、蛋白质（大分子）→胞外酶→单糖、小肽、氨基酸→吸收进菌体
• 细菌的<u>合成代谢</u>

细菌的生化反应：具备的酶不同→分解代谢产物不同→通过生化试验检测
IMVC四种试验-鉴定肠道杆菌。合称<u>IMViC</u>

• 吲哚 indol (I)
• 甲基红 Methyl red (M)
• VP 大肠杆菌-、产气杆菌+ (V)
• 枸橼酸盐利用 Citric acid (C)

杆菌++--，产气杆菌--++`

1. 热原质/脂多糖--<u>毒性成分~脂质A(类脂A)</u>/内毒素--菌体死亡崩解后释放，大多G-，耐高热、高压蒸汽(121℃、20 mins)破坏，最好方法是蒸馏，无热原质水概念
2. 外毒素/蛋白质，G+、少数G-，释放至菌体外的蛋白质。<u>抗原性强、毒性强、作用特异性强</u>。
   侵袭性酶 如链球菌的<u>透明质酸酶</u>。
3. 色素

• 水溶性色素：绿脓杆菌→绿脓色素（弥散至培养基）
• 脂溶性色素：金葡菌色素（培养基颜色不变）

4. 抗生素：多由放线菌、真菌产生，细菌仅产生少数：多粘菌素、杆菌肽。
5. 细菌素：仅作用于有<u>近缘关系</u>细菌的抗菌物质。蛋白类、抗菌范围窄。

1. 分离培养：选择培养基、画线方法接种。分散为单个菌落
2. 纯培养：液体或固体培养基，大量纯种细菌。

• 培养时间多为18~24 h（药敏实验选对数生长期6~12 h；结核菌缓慢，数天~数周）
• 气体: 严格无氧；<u>脑膜炎双球菌、布鲁司菌</u> (CO2，5%~10%)
• 温度一般37℃
• 连续培养法 不断通入气体、更换培养液、校正pH

突变：可遗传的变化

• 基因突变/点突变：<u>碱基置换、错码</u> 2类

• 染色体畸变：一大段，易位、倒位、重复、缺失。按<u>发生原因</u>:自发突变、诱发突变 2类

• 自发突变-稳定的、稳定传代；质粒起重要作用。与耐药性有关，结合性质粒可<u>通过性菌毛转移</u>。

• 诱发突变：理化因素（诱变剂）作用下，突变率比自发高10~100000倍，平均1000倍。

常用诱变剂：<u>碱基类似物、羟胺、亚硝酸、烷化剂、紫外线</u>。
物理因素:X线、γ、α、β
化学因素:金属离子、化学试剂、抗生素、农药...

噬菌体：多数<u>蝌蚪状</u>，核酸为双股线状DNA，头部外壳和尾部为蛋白质。
裂解宿主细胞，放出子代噬菌体，浑浊菌液变清，固体培养物上出现空斑。
温和噬菌体基因整合于宿主菌基因组，<u>带有噬菌体基因组</u>的细菌→溶原性细菌。溶原状态可自发停止，被裂解。
严格宿主特异性，可用于鉴定分型，<u>分子生物学工具</u>。

• 一般致病菌、条件致病菌
• 局部致病性细菌、全身致病性细菌
• 毒素致病菌：治疗主要靠<u>消除、中和毒素</u>。如：霍乱、破伤风、白喉、肉毒、葡萄球菌毒素
• 繁殖致病菌：<u>抗菌治疗</u>为主。鼠疫、炭疽、流行性脑脊髓膜炎、斑疹伤寒。
• 免疫致病菌：感染引起的免疫损伤。<u>抗变态反应治疗</u>。链球菌引起的<u>风湿病和肾小球肾炎</u>。
  ——————

细菌的致病过程

1. 附着（<u>黏膜上皮细胞表面</u>）：霍乱<u>只限于</u>附着过程。细胞表面的 <u>毒素受体</u>--神经节苷脂 GM1

• 决定附着能力的细菌 <u>表面结构</u>：黏附素
• 决定附着过程的机体细胞 <u>表面结构</u>：黏附受体

2. 侵袭：侵入细胞。机体细胞主动...<u>细菌中</u>促发进入上皮细胞的<u>结构、物质</u>→侵袭素。细菌性痢疾(出血)、伤寒沙门菌、耶尔森菌(全身疾病)
3. 增殖
4. 干扰防卫机制
   早期 <u>非特异性的免疫</u>。吞噬细胞、补体→细菌；之后 <u>特异性免疫</u>-抗体的杀伤。
   对抗吞噬细胞三种形式
5. 在吞噬细胞内产生代谢改变，在吞噬细胞内存活
6. 产生细胞毒性物质，从吞噬细胞中逃逸
7. 产生抗吞噬物质，阻止吞入

对抗补体：产生抗补体物质，激活补体但阻止“终末复合物”杀菌。造成补体大量消耗
对抗特异性免疫：抗原转化，逃避抗体作用；消耗补体，抗体不能结合补体。

5. 毒素
6. 外毒素（蛋白质）<u>霍乱毒素、炭疽毒素、白喉毒素、破伤风毒素、肉毒毒素</u>
7. 内毒素\脂多糖结构\热原质 脂多糖结构，崩解时大量释放，使用抗生素→触发内毒素休克
8. 细菌毒性膜蛋白（蛋白质） 活的细菌，鼠疫菌-“鼠毒素”、“耶尔森”菌外膜蛋白YOPs
9. 免疫损伤
   细菌与机体细胞共同的抗原性，诱生了“自身抗体”→<u>链球菌引起的风湿病和肾小球肾炎</u>。
   细菌寄生于细胞内/在细胞表面留下“异体”物质，导致免疫细胞杀伤（同时杀死细胞&细胞内微生物）→结核病、布氏菌病（测定淋巴因子如<u>白细胞介素</u>→反映免疫损伤强度）

致病相关因子·基因/致病决定因子·基因

1. 黏附素：菌毛、鞭毛、突出在表面的蛋白质
2. 侵袭素：非常复杂的概念
3. 繁殖决定因素：细菌营养相关~铁元素
4. 免疫干扰因素：鼠疫菌F1抗原→抗吞噬&抗补体、荚膜-抗吞噬
5. 毒素：外来的毒素 （霍乱毒素、白喉毒素）都是<u>噬菌体编码的成分</u>，获得噬菌体的<u>溶原性</u>后才能引起疾病

确定致病决定基因、3步

• 大量筛选丧失致病力的突变菌株
• 定位突变
• 克隆这些基因，转化丧失致病力的细菌→补足后恢复（“克隆互补”方法）

毒力（反映治病能力的<u>数量</u>概念）：使用动物/器官的疾病模型来测定，量值使用半数效量表示。

• 半数致死量（LD50）lethal dose 半数死亡区域最接近直线关系
• 最小全数效量（MLD）引起全部动物死亡的最小感染剂量

病原细菌确定原则-郭霍原则（Koch）

1. 一种疾病病人有规律地发现一种细菌
2. 能够分离这种细菌纯培养
3. 培养物引入易感动物体内，引起类似疾病
4. 实验感染的疾病中，仍然能分离同一种细菌

病毒特性

1. 病毒只含一种核酸（DNA or RNA），其他微生物同时含有2种。

病毒不含“氨基糖酸”，与其它微生物的明显区别

2. 通过基因组复制和表达子代的核酸&蛋白质，装配成完整的病毒粒子
3. 缺乏完整的酶系统
4. DNA前病毒-某些RNA病毒的RNA经“反转录”合成互补DNA（CDNA） complementary，与细胞基因组整合，<u>随细胞DNA复制而增殖</u>
5. 病毒没有细胞壁，不进行蛋白质、糖、脂类的代谢活动。对干扰代谢过程的抗生素具明显抵抗力。
   核衣壳：衣壳(蛋白外壳)和核酸 总称

分类命名：目-VRira(l)es、科-VRiri(d)ae、亚科-VRiri(n)ae、属-VRir(u)s、种

目、科、亚科、属：L\D\N\U

• DNA病毒
• RNA病毒 正链、负链

正链RNA直接呈现<u>mRNA的作用</u>，是合成互补链的模板，具感染性

增殖过程

特性：细胞内专性寄生

1. 吸附与侵入
2. 脱壳
3. 病毒成分的合成及装配
4. 释放

病毒的培养
病毒在细胞内的增殖可根据

• 细胞病变
• 出现血凝素或其他病毒抗原
• 红细胞吸附
• 对“指示病毒”的干扰
  进行<u>识别</u>

含10%二甲基亚砜的血清用于在液氮中保存细胞。
常用细胞类型--3类

• 原代细胞
• 二倍体细胞
• 传代细胞

原代细胞<u>培养</u>（1~10代）和传代细胞<u>培养</u>根本区别在于细胞能否在体外无限传代

细胞的纯化：细胞克隆技术。克隆--<u>无性繁殖方法、遗传上相同</u>
病毒形态结构：

1. 核心：DNA/RNA与核心蛋白结合→核蛋白结构
2. 核壳：蛋白质or核蛋白组成 五邻体/六邻体排列
3. 包膜or囊膜：发源于细胞膜。疱疹病毒：典型有囊膜立体对称DNA病毒

病毒抗原检测

1. 免疫荧光技术IFA--需要<u>荧光抗体</u>和<u>荧光显微镜</u>

• 标记荧光素的特异抗体查标本中病毒抗原-直接法
• 特异抗体与抗原结合、荧光素标记的<u>抗特异性抗体</u>免疫血清(IgG型抗体)与特异性抗体结合，以检测结合后的<u>病毒抗原</u>-间接法

2. 固相放射免疫测定（塑胶小球、标记放射性同位素的特异性抗体，γ-计算器检测）
3. 酶免疫技术（<u>酶免疫组化法/免疫过氧化物酶染色</u>，可直接检测抗原，显微镜下观察）和 ELISA
4. 其他：发光免疫分析技术，胶体金标记的免疫层析技术

早期抗体检测 特异性IgM抗体→诊断急性感染

IgM抗体对<u>孕妇风疹病毒</u>尤为重要

应用<u>IFA、固相放免、ELISA。</u>
注意类风湿因子(IgM)干扰

疫苗：减毒活疫苗、灭活疫苗。普遍
基因工程亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗。

病毒致病原理

临床类型

• 显性感染~隐性感染or<u>亚临床感染</u>

病毒携带者：部分隐形感染者不产生免疫力，重要传染源。
隐形感染在流行病学上具十分重要意义。`

• 急性感染or<u>病原消灭型感染</u>~持续性感染
  潜伏感染、慢性感染、慢发/迟发病毒感染、急性感染的迟发并发症

持续性感染形成原因

1. 机体免疫功能弱
2. 病毒存在受保护部位、逃避免疫
3. 病毒抗原性太弱，无免疫应答
4. 病毒产生缺损性干扰颗粒(DIP)，干扰病毒增殖，因而改变感染过程
5. 病毒基因整合在宿主细胞基因组中，长期共存

持续性感染类型

1. 潜伏性病毒感染--无病毒排出
   急性or隐形感染后、不能产生感染性病毒、非发作期不能分离出病毒

HSV-1 三叉神经节、单纯疱疹
VZV 脊髓后根神经节or颅神经、水痘、带状疱疹

2. 慢性病毒感染--不断排出体外

HBV、CMV 巨细胞病毒、EBV

3. 慢发病毒感染/迟发病毒感染
   感染后潜伏期长达数十年，慢性进行性疾病，最终常为致死性感染。
   分为2组：常见病毒引起(<u>属于逆转录病毒科</u>)~非常见病毒引起

1. 逆转录病毒科: eg.慢病毒亚科 HIV
2. 羊瘙痒病、Kuru-<u>朊病毒</u>、CJD。

4. 急性病毒感染的迟发并发症
   急性感染后1年或几年发生致死性的病毒病

亚急性硬化性全脑炎：儿童期感染麻疹病毒→青春期才发作。

感染与繁殖

1. 吸附 特异性吸附→敏感细胞表面
2. 穿入 三种方式
3. 融合 **
   囊膜与细胞膜融合→<u>核衣壳进入胞浆</u>
   <u>副粘病毒</u>以此方式，麻疹、腮腺炎病毒囊膜上有融合蛋白**
4. 胞饮 病毒穿入的<u>常见方式</u>
   细胞膜内陷、整个病毒吞引入包内形成囊泡
   囊膜病毒如流感病毒（<u>出芽方式释放</u>）借助血凝素（HA）完成脂膜间融合、核衣壳进入胞浆。
5. 直接进入 <u>少见</u>
   脊髓灰质炎病毒、衣壳蛋白构型变化→对蛋白水解酶敏感→核酸直接穿越细胞膜→到达细胞浆
6. 脱壳--失去病毒体的完整性
   <u>从脱壳到出现新的感染病毒之间叫“隐蔽期”</u>
7. 生物合成
   合成核酸分子、蛋白质衣壳，装配病毒。一个复制周期约6~8 h
8. 病毒蛋白的合成与修饰
   病毒mRNA在<u>核糖体</u>上翻译合成病毒结构蛋白和非结构蛋白。
   <u>非结构蛋白</u>不是病毒结构成分，催化调节复制的酶类和调控蛋白。(功能重要)
9. 装配与释放

• DNA病毒-核内复制DNA
• RNA病毒-胞浆内复制<u>核酸</u>及<u>合成蛋白</u>

6 h 1个细胞可产生1万病毒颗粒

7. 释放方式

• 宿主细胞裂解-无囊膜病毒(腺病毒、脊灰病毒)
• 出芽方式-有囊膜病毒(流感病毒、疱疹病毒)、也可通过细胞间桥or细胞融合邻近细胞

8. 再感染

缺损干扰颗粒

1. 本身不能繁殖
2. 有辅助病毒存在时方能增殖
3. <u>干扰同种病毒而不干扰异种病毒的增殖</u>
4. 在细胞内与亲代病毒竞争性增殖

疫苗中大量缺损干扰颗粒会影响活疫苗的免疫效果

病毒感染类型

1. 杀细胞性感染
   细胞裂解、溶解
   脊灰、柯萨奇、鼻病毒等<u>无囊膜</u>的小RNA病毒
2. 稳定性感染
   <u>有囊膜</u>、出芽，细胞不会死亡、轻微病变
   HSV单纯疱疹病毒、流感、脑炎、麻疹
3. 整合感染
   DNA病毒的<u>DNA</u>及逆转录病毒(RNA病毒反转录)合成的<u>cDNA</u>插入宿主细胞基因→前病毒provirus
   可转化为癌细胞
   EBV、HPV、HBV、HTLV-1人类嗜T细胞病毒

致病机制

1. 感染细胞的损伤与死亡

病毒蛋白质和病毒颗粒大量积聚
形成包涵体

2. 细胞膜改变
   ☆麻疹病毒&副流感病毒→感染细胞与邻近细胞融合
   感染细胞膜上常出现病毒编码新抗原，流感病毒→血凝集和神经氨酸酶→感染细胞成为靶细胞→免疫攻击
3. 病毒感染中炎症反应和免疫病理损伤
   特异性<u>细胞免疫反应</u>：麻疹和疱疹的皮疹、流感的黏膜炎症和肺炎
   抗原抗体补体复合物引起细胞浸润：急性黄疸型肝炎
   免疫病理损伤：第 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型变态反应&自身免疫
   自身免疫：变态反应性脑炎、多发性神经炎、变态反应型血小板减少性紫癜
   自身免疫的发病机制
4. 改变宿主细胞的膜抗原
5. 病毒抗原和宿主细胞的交叉反应
6. 淋巴细胞识别功能改变
7. 抑制性T淋巴细胞过度减弱
8. 病毒感染引起的暂时性免疫抑制-许多病毒均可引起、流感、腮腺炎、麻风疹、登革热、马脑炎、单纯疱疹、巨细胞病毒
   麻疹病毒感染能使病儿<u>结核菌素阳性转为阴型反应，持续1～2月。</u>

宿主细胞的变化

1. 细胞膜的变化
2. 细胞融合 溶酶体酶作用于细胞表面
   麻疹病毒、副流感病毒
   病毒扩散方式之一
   <u>麻疹病毒➡️华新Warthin多核巨细胞。</u>
3. 细胞表面产生新抗原
   <u>流感病毒、副粘病毒</u> 血凝素HA-病毒编码，能吸附红细胞。
   培养细胞膜上出现血凝素抗原、红细胞吸附试验(HAd)阳性－病毒增殖指标。
4. 包涵体的形成
   普通光学显微镜→圆形or椭圆形斑块→inclusion

在胞浆内的痘病毒
在胞核内的疱疹病毒
两者都有的麻疹病毒

包涵体的本质

1. 病毒颗粒聚集体
2. 增殖痕迹
3. 细胞反应物。

诊断依据:狂犬病、嗜酸性包涵体（内基小体Negri bodies）

3. 细胞转化和增生
   <u>肿瘤病毒</u>感染细胞后不损伤和溶解，而引起生物性状改变，称为细胞转化
   转化的细胞多数在<u>染色体中整合有病毒基因</u>称为病毒的整合
   部分转化的细胞→肿瘤细胞，但并非所有都癌变。
   转化细胞的特征
4. 生长力旺盛（培养时失去了单层细胞的接触抑制）
5. 易于连续传代
6. 细胞表面出现新抗原

肌体变化

1. 组织器官损伤及组织器官亲嗜性病毒对细胞的杀伤作用
   <u>可有2种组织亲嗜性</u>

• 肠道病毒71型 嗜皮肤的手足口病&嗜神经的脑膜炎 手足口重症
• HSV 嗜皮肤黏膜也可引起中枢神经系统疾病如婴幼儿脑炎

病毒嗜性的基础：细胞有病毒受体并具备增殖条件。
病毒感染的炎症细胞主要是<u>单核细胞(M、淋巴细胞和浆细胞)浸润</u>
病毒感染急性期常出现白细胞减少

2. 免疫病理损伤
3. 体液免疫病理作用
   登革病毒与抗体在红细胞、血小板<u>表面结合，激活补体</u>，造成红细胞、血小板破坏，临床出现出血、休克综合征
   病毒抗原与抗体结合的<u>免疫复合物长期在血流中、沉积后激活补体</u>引起Ⅲ型变态反应

- 沉积在肾毛细血管基底膜**➡️蛋白尿、血尿**
- 沉积在关节滑膜➡️**关节炎**（*☆肝炎患者关节改变*）
- 发生在肺部➡️**细气管炎、肺炎**（*☆婴儿呼吸道合胞病毒感染*）

2. 细胞免疫病理作用

- 特异性细胞毒性**T细胞**（CTL）同时**损伤**受病毒感染出现膜新抗原的**靶细胞**
- 共同抗原性导致<u>自身免疫应答</u>（*麻疹、腮腺炎感染后→脑炎；慢性肝炎*）

不宜通过<u>增强免疫功能</u>去治疗

3. 对免疫系统的影响
4. 引起暂时性免疫抑制
   麻风疹、CMV感染对<u>特异型抗原&促有丝分裂原（PHA、ConA）</u>反应减弱
   同时<u>结核菌素皮试</u>转阴1～2月。
5. 对免疫活性细胞的杀伤
   HIV→辅助性 T细胞（CD4＋）强亲和性和杀伤性,CD4+和CD8+细胞比值倒置。
6. 引起自身免疫性疾病
   改变细胞表面结构→“非己物质”→成为靶细胞受到免疫细胞、免疫因子作用