实验小白一步一步养细胞的准备过程
我最近养的HepG2肝癌细胞,这是我第一次养细胞
养细胞准备过程:
装液体培养基的培养瓶、有条件的实验室可以用清水浸泡之后,然后用刷子刷洗,之后用酸(重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配置)浸泡,之后再冲洗;我们实验室没有酸,然后就用水和酒精,差不多1:1,浸泡,洗的时候带上手套哦,然后加入洗洁精进行冲洗,然后冲洗干净,然后放在烘箱里把它们烘干,里面不要有水,然后培养瓶瓶盖不要拧紧,用牛皮纸包扎好,然年放进去高压蒸汽灭菌,灭完菌之后再放入烘箱烘干,当干了之后就把它直接再培养箱里拧紧瓶盖,然后放入细胞培养室里某个专门放一些灭过菌的物品。枪头,离心管灭菌的话,枪头装好之后用报纸包扎好,橡皮筋绕一圈,离心管的话就放入铝箔盒里,瓶盖不需拧紧,然后用报纸包好,之后放入高压锅里灭菌即可。灭完菌之后烘干即可,放入干净的无菌的柜子。培养皿一般可以买corning培养皿,什么规格都有,自行选择,冻存管也是必不可少的,还有细胞冻存所需要的DMSO,都需要提前准备。
我养肝癌细胞用的是DMEM培养基,然后90%DMEM+10%血清,建议大家用血清之前把血清用过滤器过滤一下(我用的貌似是0.2微米的过滤器),再加入1%双抗(我买的是100×的双抗),我平时一般都配置50ml培养基(DMEM 45ml,血清 5ml,双抗0.5ml),这样培养基就配成了。然后就是PBS啦,有条件的就直接买配好的就可以了,但是我们是自己买的PBS粉末(一包4块钱),直接按照要求用蒸馏水配好就可以了,配好的PBS瓶盖不要拧紧,用牛皮纸包扎好,灭菌之后烘干,拧紧放入4°C冰箱即可。然后就是胰酶了,胰酶的话直接买配好的就可,根据你养细胞消化是否需要EDTA进行选择,当然也可以自己配,买细胞培养用的胰酶粉末,然后一般就是0.25%胰酶+0.02%EDTA(100ml灭菌PBS+0.25g胰酶+0.02gEDTA),之后用过滤器过滤之后可以用了,可以去放入离心管里并放在4°C冰箱,然后其它的放入-20°C冰箱保存就可(胰酶粉末也要放在-20°C保持哦)。这样用品就基本准备好啦,可以开始养细胞了。
之后的步骤会后续发下来,有什么错误的,大家可以指正,欢迎批评指正。