EDU检测细胞增殖

细胞增殖

原理:

原理

EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
EdU法检测细胞增殖,无须抗体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的创新方法。
EdU检测试剂盒不仅仅可以标记增殖细胞,同时还借助了细胞核染料,对所有细胞(包括增殖细胞和非增殖细胞)的细胞核进行标记,通过细胞增殖细胞个数和所有细胞个数,得到增殖细胞的比率。计算结果准确可靠,应用价值广

操作步骤

  1. 细胞培养:取对数生长期细胞,以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中,培养至正常生长阶段
  2. 药物处理:根据实验需要进行各种药物处理
  3. EdU标记:用细胞培养基按1000:1的比例稀释EdU溶液 (试剂A),制备适量50μM EdU培养基;
    注:1)EdU浓度与孵育时间相关,短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM),长时间孵育(>24h)宜采用低浓度 (1~10μM);
      a.如果需配置10μM EdU培养基,需调整为5000:1稀释比例;
      b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
  4. 细胞固定
  5. Apollo染色
  6. 图像获取及分析
图像
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