一、黑胶虫污染解决方案

黑胶虫污染是细胞培养中一种常见且具有迷惑性的污染类型。海星生物通过检测发现，“黑胶虫”主要为支原体污染，部分为未知的增殖不明显的细菌污染。在低倍显微镜下，黑胶虫呈点状或片状黑色颗粒；在高倍显微镜下，黑色颗粒会进行原位无规则运动（类似布朗运动），故得名“黑胶虫”。这种污染物可通过细胞传代扩散，数量不断增多，并与细胞竞争培养基中的营养物质。污染早期对细胞影响较小，但随着其数量增长，细胞会因营养不足而导致状态变差，出现空泡化，甚至死亡。

常见的污染表现包括：

培养液不浑浊，但低倍镜下可见黑色颗粒状或片状物质；

高倍镜下黑色颗粒在原地进行“布朗运动”，且与细胞数量呈负相关；

随着培养时间延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；

污染细胞营养消耗快，需要频繁更换培养液；

细胞生长缓慢，状态差，空泡化严重，甚至可能导致细胞形态改变。

1. 解决方法

海星生物HyCyte® 黑胶虫清除试剂（1000X）（货号GUMR-R003，规格2mL），其主要成分为抗菌素，可以有效控制和杀灭血清、培养基和细胞中的“黑胶虫”，同时对常见细菌也有一定清除作用。该产品在清除“黑胶虫”的同时几乎不影响细胞本身的生长环境，对细胞无害。

2. 使用方法：

使用前将试剂瞬离混匀；

按1:1000比例配制清除完全培养基（如5mL完全培养基+5μL试剂）；

弃去原培养基，建议用PBS冲洗细胞2-3遍；

添加预热的含试剂的完全培养基，按常规方法培养；

使用一周左右即可见明显抑制效果；

如实验室环境中污染源较多，可长期使用以达到预防效果。

注意事项：某些敏感细胞系（如杂交瘤）所需浓度应降低50%。

3. 注意事项

4°C保存有效期为1个月，-20°C冷冻避光保存有效期为12个月；

避免反复冻融，建议分装保存；

如发现结晶，涡旋振荡使其溶解即可；

本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。

二、支原体污染解决方案

支原体是一种直径约为0.1-0.3μm、没有细胞壁、呈多形性的原核生物，是细胞培养中最常见的污染源之一。由于体积微小且无细胞壁，常规光学显微镜下难以直接观察，传统双抗（青霉素/链霉素）对其无效。支原体污染的主要来源包括血清、培养基、操作者及实验室环境，一旦侵入细胞培养体系，会通过细胞传代迅速扩散，干扰细胞代谢和信号转导，甚至诱导染色体异常。据统计，全球约有15%-35%的细胞培养体系存在支原体污染。

1. 解决方法

海星生物提供三款支原体处理产品：

（1）HyCyte®支必清支原体预防试剂盒（1000X）（货号GUMR-R002，规格1mL/1mL×5）

用于预防多种支原体感染，可有效预防莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体和口腔支原体；

对培养细胞无细胞毒性副作用；

使用浓度：按1000×稀释（1mL培养基+1μL试剂）；

使用一周左右可见明显预防效果，可长期使用以达到预防目的。

（2）HyCyte®支必清支原体清除试剂盒（1000X）（货号GUMR-R001，规格2mL）

用于清除已感染的细胞培养；

可有效去除多种常见支原体，同时快速去除支原体引起的黑胶虫颗粒；

采用双组分循环方案：MR1处理3天→MR2处理4天，循环2次后检测确认；

使用前建议用PBS冲洗细胞2-3遍；

对细胞无毒性副作用。

注意事项：敏感细胞系（如杂交瘤）浓度应降低50%；使用时注意无菌操作；仅限科研使用。

（3）HyCyte® Anti-Myco广谱型支原体清除试剂（200×）（货号GUMR-R004，规格2mL）

用于清除已感染的细胞培养中的多种支原体污染

可有效清除莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体和口腔支原体等常见菌株，覆盖85%以上污染类型

核心优势：

广谱高效——对多种支原体均有强力杀灭作用；

细胞友好——对培养细胞无明显细胞毒性副作用，不影响后续实验（如细胞测序、功能验证）；

操作简便——无需复杂步骤，直接按比例添加至完全培养基中即可

建议稀释比例为1:200，即每1mL完全培养基中添加5μL支原体清除剂；

使用流程：

弃去原培养基，用PBS冲洗细胞2-3遍；添加预热的含清除试剂的完全培养基，按常规方法培养；通常使用一周左右即可见到明显的清除效果

对于某些敏感细胞系（如杂交瘤细胞），建议将作用浓度降低50%；

补充说明：支原体污染是细胞培养的“隐形杀手”，其体积微小（0.1-0.3 μm）、无细胞壁，可透过0.2μm滤膜，且对常规抗生素具有抵抗力污染后会导致细胞形态改变、生长受限、功能异常，严重干扰实验结果，因此定期检测和及时清除至关重要。操作时注意无菌技术，并穿戴实验服和一次性手套。

3. 注意事项

建议分装保存以避免反复冻融，如发现结晶，涡旋振荡使其溶解即可

4°C保存有效期为1个月，-20°C冷冻避光保存有效期为12个月；

避免反复冻融，建议分装保存；

如发现结晶，涡旋振荡使其溶解即可。

总结：支原体污染是已知的微生物污染，可通过特定检测方法（如PCR、荧光染色）确诊，有较成熟的清除方案；黑胶虫污染来源和性质尚不明确，处理需结合多种方法，且效果可能因具体情况而异。

技术服务：CRISPR/Cas9细胞基因编辑、CRISPR文库筛选/文库病毒/载体构建、分子诊断参考品/突变基因参考品/融合基因参考品、细胞稳转 / 细胞干扰

细胞试剂：HyCyte®干细胞/原代细胞/细胞株、三系诱导培养试剂、细胞专用培养基、基因编辑试剂盒、病毒现货、预筛选胎牛血清