小鼠小胶质细胞(BV2)培养要点及异常解决方案

BV2小鼠小胶质细胞,来源于1990年,应用携带癌基因v-raf/v-myc的反转录病毒J2感染原代培养的小鼠小胶质细胞而获得的永生细胞系。免疫组化结果显示BV2为MAC1、MAC2阳性,而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。且是高度纯化的永生细胞系,同时该细胞系具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能特点,相较于原代培养的细胞而言,永生化的细胞系培养起来更为容易。因此目前被广泛的运用于科研究当中。

细胞名称:小鼠小胶质细胞

细胞别名:BV-2

产品货号:TCM-C718

种属来源:小鼠

组织来源:

细胞形态:多形型

生长特性:半贴壁生长

培养体系:DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培养基货号:TCM-G718

传代比例:1:3-1:6,每2-3天换液一次

传代周期:48-72 h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

质量检测:细菌、真菌、支原体检测均为阴性

小鼠小胶质细胞(BV2)细胞特性

① BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。悬浮细胞为圆形,贴壁细胞既有圆形也有梭形。由于圆形细胞折光率高,它的边缘看起来是发亮的;梭形细胞则向两端伸出黑色突起。

② BV2细胞传代比例1:3-1:6,传代周期2-3天,中途每2~3天需要进行补液或者换液,维持细胞所需营养。

小鼠小胶质细胞(BV2)注意事项

① BV2细胞冻存复苏细胞贴壁性差,基本处于悬浮细胞状态,细胞培养48小时后收集悬浮细胞和贴壁细胞,再次分瓶传代,细胞会呈现多边形贴壁细胞和悬浮细胞两种形态。

② BV2细胞正常细胞形态为半悬半贴,传代时收集悬浮细胞在和通过胰酶消化后的贴壁细胞合并一起分瓶传代培养。

BV2细胞异常生长形态和解决方案

异常形态1:细胞全部飘起,完全不贴壁

① 培养基偏碱。培养瓶不透气或者开封时间过长,培养基PH将增大,可见培养基呈紫红色。BV2对培养基酸碱度较为敏感,在偏碱培养基中培养数小  时后将会全部飘起。

解决方案:给细胞换上新鲜配制的培养基,并使用透气瓶。

异常形态2:细胞形态变为阿米巴样

解析:小胶质细胞是一种可塑性极高的细胞,可通过特定因素激活,从而发挥其免疫功能。从静息态变为激活态的过程中,小胶质细胞形态也随之发生改变。

实验中常用细菌脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFNγ),分别模拟细菌和病毒感染,来刺激小胶质细胞激活。受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样,如果细胞没有受到任何刺激,就已经呈现阿米巴样,那么细胞有可能发生了自分化。

其原因可以从以下几点考虑:

① 存在潜在微生物污染,刺激细胞自分化。

解决方案:通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型,并排查污染源头。

② 使用的胎牛血清内毒素高,内毒素刺激细胞自分化。

解决方案:尝试使用其他胎牛血清品牌,或许能得到改善。

异常形态3:全都是分枝状细胞,圆形细胞少

解析:这种形态往往伴随着细胞生长慢或生长停滞的情况。由于圆形细胞增殖速度较快,在圆形细胞缺失的状况下,整体增殖速度就会减慢。

解决方案:由于BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,贴壁和悬浮细胞的比例并不固定,当悬浮细胞较多时,换液和传代时要将悬浮细胞收集,避免圆形细胞的大量损失。

总而言之,BV2细胞的形态、生长状态与其生长环境息息相关,给细胞以最合适的环境,严格按照要求规范操作。

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