转基因小鼠鉴定问题一:DNA跑胶问题

1.条带不均一,呈现锯齿

可能的原因有:

  • 1.胶浓度较高,关键是没有混匀就凝固了,导致凝胶在缓冲液里分布不均,你试试用1%的浓度配胶,同时注意摇匀后灌胶;
  • 2.电压不稳,导致跑胶过程中条带歪曲,也不用那么高的电压跑的,你试试恒流跑20—30mA,恒压显示一般为50-60V(这个跟电泳槽有关,具体的数据看你的电泳槽说明)(参考:DNA琼脂糖凝胶电泳图,条带W状,怎么回事)。另一篇帖子里,说的是80v-140v(如何选择PCR胶浓度、电泳电压及时间

改进措施:

  • 配胶时候,微波炉加热久一点,
  • 充分混匀,高火使其溶解,低火时候使其充分混匀
  • 跑胶电压调整成100V

结果展示:

2.跑胶结束后,发现整个胶条变薄

image.png

找了很多原因:

1.桌面不平,换成地上进行配胶

2.换了配胶的架子

3.换了配胶的电泳液

都没有改善,然后就把电泳液换了,然后就好了。

当然,作为对啥事都喜欢刨根问底的我来说,还是想找到这个原因?我就去必应一下,琼脂糖凝胶电泳实验技巧及异常分析,这篇帖子最下面的总结表格还是很nice的。大约的原因就是电泳液用久了,很多人不盖盖子,然后水分挥发厉害(出现这个时候正是换季,开了空调,而电泳槽正对着空调口),我们学生看电泳液不够就补了一点液体,从而导致盐分超标。

遇到电泳诡异事件,把电泳液换一遍,没有条带的问题解决一大半。

参考资料:

1.《鼠年说鼠》第十二期:如何选择PCR胶浓度、电泳电压及时间?

2.DNA琼脂糖凝胶电泳图,条带W状,怎么回事

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