61.《Bioinformatics Data Skills》之SAM文件格式(1)

我们已经知道 BED 与 GTF 文件用于存储基因组区域与基因组特征注释信息。还有一种文件用于存储高通量read比对数据,叫做SAM文件(Sequene Alignment Mapping,其压缩的二进制形式叫BAM)。SAM 文件应用非常广泛,有必要了解一下其格式。

SAM 头部

数据地址:https://github.com/vsbuffalo/bds-files/tree/master/chapter-11-alignment

这里以一个小 SAM 文件为例子(使用线虫的参考基因组进行模拟read对比创建),以 head 命令查看文件的前10行内容:

image-20210830205603602

SAM 文件的头部以@开头,紧接的两个字母代表信息的类别,接着以 tab 分隔的 key:value 对展示具体信息,以下是每行的详细解释:

  1. @SQ 代表参考基因组序列信息,所有分离的染色体都对应一行这样的信息。SN 代表序列名字,比如 SN:I 为 1 号染色体,LN 代表染色体长度。
  2. @RG 代表 read 组(read group),这里的ID是唯一的字符串,代表 read 的来源。通常为产生read的通道,这样一些程序可能以此判断序列数据是否有批次效应。ID 是唯一必要的信息,其它可选信息包括SM代表的样本名,以及PL代表的测序技术如ILLUMINA, PACBIO等
  3. @PG 代表生成SAM文件的程序,ID 也是唯一的,VN 代表程序版本,一般是程序自动生成。
  4. 这行没有以@开头,所以是SAM文件的内容第一行,这部分的说明请参考下一节的内容。

对于 SAM/BAM 文件,标准的交互方式是采用 samtools 工具,通过这个工具的子命令 view 结合 -H 参数 查看 SAM 文件头部内容,如下:

$ samtools view -H celegans.sam
@SQ     SN:I    LN:15072434
@SQ     SN:II   LN:15279421
@SQ     SN:III  LN:13783801
@SQ     SN:IV   LN:17493829
@SQ     SN:MtDNA        LN:13794
@SQ     SN:V    LN:20924180
@SQ     SN:X    LN:17718942
@RG     ID:VB00023_L001 SM:celegans-01
@PG     ID:bwa  PN:bwa  VN:0.7.10-r789  CL:bwa mem -R @RG\tID:VB00023_L001\tSM:celegans-01 Caenorhabditis_elegans.WBcel235.dna.toplevel.fa celegans-1.fq celegans-2.fq

其中-H代表头部,此命令也可以直接用于bam文件:

$ samtools view -H celegans.bam
@SQ     SN:I    LN:15072434
@SQ     SN:II   LN:15279421
...

可以与Linux命令组合,例如查找@RG信息:

$ samtools view -H celegans.bam | grep "^@RG"
@RG     ID:VB00023_L001 SM:celegans-01

如果不加任何参数的话则返回不包括头部的内容:

$ samtools view celegans.sam | head -n 1
I_2011868_2012306_0:0:0_0:0:0_2489      83      I       2012257 40      50M [...]
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