【实验】提RNA and qPCR

q-PCR流程图

逆转录完后 补加80μL 去离子水 → 20+80=100μL

【备注】若细胞量很少，RNA浓度<150不适用上述 计算工具，可全部加入


【补充】

组织提RNA：

预冷匀浆机底座（-20℃）

① EP管，组织块（20~50mg左右，不要太大，RNA浓度过大最后还是要稀释），1mL Trizol

② 2颗珠子，频率60Hz，1min（没完全匀浆继续加）

③ 吸出液相到新EP管，冰上静置5min，回收珠子

④ 其余同上图后续（+ 200 μL氯仿抽提......）



上机

每个孔：

Sybr               10μL

前后引物         0.8 + 0.8μL

ddH2O            6.8μL

cDNA              1.6μL

总计                 20μL

【若孔较多，可先在EP管配n+2~3孔反应体系，最后上cDNA】

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