§新毕设|2提取质粒DNA

提质粒:

1、方法:碱裂解法

https://wk.baidu.com/view/2de4724480eb6294dc886c88?pcf=2原理

2、步骤:

0.1%的抗生素(250mL培养基+250微升抗生素)

37℃恒温摇床10h

富集菌液(超净工作台倒1.5mL离心管,12000rpm离心1min,弃上清;重复一次)

+Buffer P1 250微升(作用:溶解),插牙签振荡至没有菌体

+Buffer P2 250微升(作用:裂解),轻柔摇晃,打开盖子后发现粘稠,有“拉丝”现象(表明是大肠杆菌,不是杂菌)

+Buffer P3 350微升(作用:复性),轻轻摇晃,置于4℃冰箱(取出后有沉淀)

此时装好吸附柱和收集管,用700微升的Buffer BL激活吸附柱(需要离心)

冰箱取出12000rpm离心10min(去蛋白质)后,取上清吸至吸附柱,12000rpm离心1min,弃废液

+加有2倍无水乙醇的Buffer PW 700微升,12000rpm离心1min,弃废液;重复一次(作用:用75%的乙醇清洗)

最大转速(14800rpm)离心2min

用1.5mL离心管代替收集管,干燥吸附柱5min(作用:去乙醇)

+Buffer EB 70微升(注意:垂直于吸附膜上加),静置5min

最大转速(14000rpm)离心1min,弃吸附柱,留离心管

测浓度(3个参数:260/280;260/230;ng/微升)

PCR

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