一、物品准备

① 带盖流式管（照紫外）

② 抗体

③ 冰盒

二、步骤

PBMC为例（离心参数不同）

【1】上样管准备

① 轻吹，收集细胞离心 300g 5min

② 1mL PBS重悬，取20μL计数，余离心后去上清

③ 沉淀用100μL PBS重悬

④ 取新EP管，将悬液转移（5mL离心管太深，加抗体时枪身可能引入污染）

⑤ 加抗体，振荡，冰上避光孵育30min

For flow cytometric staining, the suggested use of this reagent is 5 µl per million cells in 100 µl staining volume or 5 µl per 100 µl of whole blood.

⑥ PBS 洗2遍

⑦ PBS 重悬（可加不多于2%的血清）上机，维持浓度 10^6 ~ 10^7/mL（1mL液体耗时25~30min）

【中心实验室BD 500μL即可，Beckman稍微多一点；分析 - 肿研所张老师200μL】

【2】接收管准备

接收管加1640全培（双抗浓度可稍微上调，血清浓度可提高到20%）

接收管要多备，因分选出来的不仅有细胞，还有远大于上样量的鞘液

可按 每2mL上样液 ~ 1阳性管 + 2阴性管 准备

【3】送样

① 1000μL枪、枪头盒、无菌PBS（以防老师要求稀释）、滤网 + 50mL离心管（以防万一）、光盘

② 冰盒，上样管，接收管，酒精