一、物品准备
① 缓冲液（小分子室4℃冰箱，外用非无菌）
② 流式管
③ 抗体
④ 冰盒
二、步骤
以PBMC为例
① 轻吹，收集细胞离心 300g 3~5min
② PBS洗（① → 去上清 → 适量PBS重悬 → 离心）
③ （若细胞较少，可省略）缓冲液洗1遍
④ 缓冲液重悬100~200μL，计数（损耗20μL）
【注意】缓冲液用量基于对所收集细胞数目了解。若本来就少，可用较大的体积重悬计数
【待尝试】用125μL（20+100+5）重悬，计数20μL，最后吸取100μL孵抗体
⑤ 取新EP管，取 细胞 于100μL 缓冲液（可全加，按细胞数调整抗体用量）
⑥ 加抗体，振荡，冰上避光孵育30min
For flow cytometric staining, the suggested use of this reagent is 5 µl per million cells in 100 µl staining volume or 5 µl per 100 µl of whole blood.
10^6~10^7：3μL
10^8：加6μL
达科为 - 流式抗体用量
影响染色效果的因素：抗体浓度 >> 细胞数目
⑦ 缓冲液洗2遍
⑧ 缓冲液重悬上机，维持浓度 10^6 ~ 10^7/mL（过大容易堵管道，要赔巨款！过小浪费钱）
