AAV 滴度是指 AAV 的浓度,通常分为下述两类
1. 物理滴度 - 病毒颗粒数
这个单位表示所有病毒颗粒的总数,包括含有基因组的完整病毒颗粒和空的/不完整的病毒颗粒。单位:vg 或 vp
vg: 病毒基因组。通常被用作物理颗粒总数的同义词,尤其是在商业化和标准化表述中。
vp: 病毒颗粒。含义与vg基本相同。
常用衍生单位:vg/mL 或 vp/mL: 每毫升溶液中的病毒颗粒数。这是最常用的滴度表示单位,尤其是在描述病毒储备液的浓度时。
vg/kg: 每公斤体重给予的病毒颗粒数。这是在动物体内实验中最常用的给药剂量单位。例如,常见的尾静脉注射剂量为 1×10^11vg/kg到 1×10^13vg/kg。
测量方法:
ELISA: 通过检测AAV衣壳蛋白的含量来推算病毒颗粒总数。这种方法无法区分完整病毒和空壳病毒。
AUC: 分析型超速离心。是区分完整病毒颗粒和空壳病毒的“金标准”方法,但设备昂贵,操作复杂,常用于工艺开发和质控。
2. 基因组滴度 - 有基因组的病毒颗粒数
这个单位特指包含完整转基因基因组的病毒颗粒数量。它比物理滴度更能反映“有效”病毒的浓度。单位: vg
注意: 这个“vg”与上面物理滴度中的“vg”在字面上完全相同,这常常是混淆的来源。关键在于理解其测量方法,它特指“可检测到基因组的颗粒”。
常用衍生单位: vg/mL
测量方法:
qPCR/ddPCR: 目前最主流的方法。通过定量PCR技术,对病毒基因组上的特定序列(如polyA、启动子或转基因本身)进行定量。这种方法测得的是包含完整且可被检测到的基因组的病毒颗粒。它不检测空壳病毒。