Enhanced delivery of CRISPR/Cas9 systembased on biomimetic nanoparticles for hepatitis B virus therapy

基于仿生纳米颗粒的CRISPR/Cas9系统增强递送用于乙型肝炎病毒治疗

肝细胞核中共价闭合环状DNA（cccDNA）的持续存在对实现乙型肝炎病毒（HBV）的全面治疗构成了重大障碍。由于动物模型中cccDNA稳定表达的挑战以及递送系统的有限非免疫原性，CRISPR/Cas9目前用于靶向和消除cccDNA的应用仅限于体外研究。本研究通过引入一种利用双子表面活性剂（GS）的新型非病毒基因递送系统来解决这些局限性。开发的系统通过用红细胞膜（RBCM）或肝细胞膜（HCM）修饰，产生表面带负电荷的稳定靶向CRISPR/Cas9纳米药物，从而产生GS-pDNA@Cas9-CMs复合物。这些GS-pDNA复合物在4:1 w/w的比例下完全形成。GS pDNA HCM的体外转染效率达到54.61%，显示出同源靶向性和优异的安全性。此外，该研究从六个序列中确定了最有效的单导向RNA（sgRNA），这些序列由GS-pDNA@Cas9-HCM.使用GS-pDNA@Cas9-HCM，观察到体外HBV cccDNA显著减少96.47%，体内HBV cccDNA减少52.34%，其他HBV相关标志物显著减少。对AML-12细胞在不同时间和温度条件下摄取GS复合物的研究表明，网格蛋白介导的GS pDNA内吞作用（CME）和小窝蛋白介导了GS pDNA HCM和GS pDNA RBCM内吞作用。综上所述，本研究提出了基于GS的仿生基因编辑纳米载体(GS-pDNA@Cas9-CMs)并利用CRISPR/Cas9探索了它们对cccDNA的精确和靶向清除，证明了其在体外和体内的良好生物相容性。这种创新方法为推进HBV的治疗提供了一种有前景的治疗策略。

其中体内RNA转染采用EntransterTM-in vivo RNA来实现，DNA采用EntransterTM-in vivo DNA来实现。