DNA跑胶加loading buffer和EB的原理:
1、在需要电泳的DNA溶液里加上loading buffer,目的是在电泳时可以看到指示带,有两条:跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯氰FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。
第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;
第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。
另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。
2、在制备琼脂糖胶时,需要加入EB,EB可以与DNA结合,在紫外灯下显示DNA位置,也就是你说的白色条带。
3、现在有些实验室用一些新型染料(EB有毒),可以用蓝光而不是紫外观察条带,这个时候看到的DNA条带其实是淡蓝色的,不是白色的。
同时EB是全球公认的最好的核酸燃料,只是其有强毒性,需格外注意不要接触皮肤,核酸染色产品目前还有低毒性的goldview、gillgreen等,只是胶图效果清晰度差一些。