| 名称 | 电离形式 | 测得对象 |
|---|---|---|
| ESI/MALDI | 软电离 | protein/peptide |
| PMF | 软电离 | 酶水解以后肽段 |
| 测序 | 硬电离 | 质谱里打碎肽段 |
1 质谱概论
质谱，用于未知化合物的鉴定，实际上提供的分子的m/z.
灵敏度：1ng就可。但不线性。因为质谱只能分析变成正离子的部分。灵敏度高，但噪音也高
结构：一般用核磁共振，碳谱，氢谱。但质谱有时候也能解一些分子结构。软电离：只出一个分子离子峰；硬电离：一个分子中的基团被打碎。
质谱仪的误差：高斯峰
技术指标
👉灵敏度，噪音要小
👉分辨率
👉准确度
👉稳定性
👉质量范围
👉动态范围：差
考虑同位素：馒头峰->平均分子量
2 质谱原理
⚪离子化：气相，离子化（极性高容易离子化），再用质核比分离
有机物：气化容易，带电荷难
无机物：气化不易，带电荷简单。
⚪软电离：待测物的组成
⚪硬电离：待测物结构
质谱一般应用于小分子，对于大分子，要气化、带电、不伤害分子完整性，难！So what's the solution?
3 💡 ESI，电喷雾-John B.Fenn
样品引入方式：流动注射
过程：溶解在极性挥发溶剂中（不能含不挥发的盐，否则盐也像氢离子一样加过来）加上高压在喷嘴上，溶剂带上电荷，而后，之后在气体（真空？）中干燥（所以溶剂要容易挥发，否则盐留着影响），导致液滴破裂带上一定量的电荷
带电荷不定，但呈高斯分布
蛋白质带上电荷的方式是加氢离子，因此峰2001实际上是2000。MW<1200 Da 单电荷离子；MW>1200 Da高斯分布
关于带正负电荷？氨基啊这种一般带正电荷，但羧基啊核酸啊这种会带负电荷。PH也会影响：酸性带负电，可用醋酸、TFA调节；碱性带正电，可用氨水调节。
🈚 溶剂性质
🈚去溶剂：氮气，吹+防止与氧气反应
多电荷峰解析
一般n都是整数，混了2个蛋白质且含量相似，可能导致n不是整数，这时候去找其他峰算一算
软件可以转化为单一谱图，最大熵谱
想通过一次质谱多个蛋白质定量？ 要求两种蛋白质带电荷的能力相同，否则带电荷能力弱的可能就不怎么出峰
多电荷峰的优点：
👨🏭容易判定杂峰
👨🏭可以判断具有高级结构/变性
👨🏭精确程度也可测蛋白质翻译后修饰
👨🏭 分析范围可达 1,000,000，m/z则小于4000
👨🏭 可与液相联用，可MS/MS
👨🏭 低噪音
缺点
👨🏭 不能分析非极性
👨🏭 受金属离子干扰
4 💡MALDI，基质辅助激光解析系统
-
可针对热敏感、不挥发的固相化合物。固体膨胀出来直接是气体
image.png - 波长一般选择 337nm 可以被基质小分子吸收，但不会被蛋白质中芳香环状分子吸收
- 一般就带1个正电荷，可得分子离子峰，非常适合用于飞行时间质量分析器
- 适用于大分子
- 分析速度快。可以用96孔板多个一起
- 对分子耐受性高（可以有金属离子，可以没有极性）
- 串联能力MS/MS
基质应具有的特性
👉 能与样品在同一种溶剂中溶解
👉 可吸收激光（苯环）
👉 吸收了能分裂（有个羧基），使得样品分子离子化
优点
👨🏭 检测范围 500,000 Da
👨🏭 分析速度快
👨🏭 适合分析混合物
👨🏭 准确度高，灵敏度高
👨🏭 能耐受盐、缓冲剂和非挥发性杂质
缺点
👨🏭 金属离子干扰
👨🏭 无法直接接LS
👨🏭 实现MS/MS 困难
👨🏭 需要制备基质
