写在前面
荧光定量(qPCR)早已是各个分子生物学实验室常用的简单的实验技术。十年的变化很大。10年前(我大一)到实验室时,常规的pcr都不舍得加多0.2ul的rTaq,更不提跑一个qPCR就烧掉大几百的荧光定量。伴随着测序成本的降低和科研经费支持的增加(主要是说我们小打小闹的单位),qPCR实验天天都做,天天都要处理和分析数据。
写这个小工具的动机
针对qPCR数据的分析方法有两种,其中一种即为 2deltadelta....(具体请参考荧光定量PCR的随机手册)。虽然事实上,每台机器应该都会有随机软件可以用于分析,但可能多数人还是并不习惯或者喜欢使用该些软件。或许主要原因是....用起来太麻烦。
三四年前,我记得我一直有喊师弟或者师妹去写一个脚本或者软件,这样会简化分析流程,可以省下很多时间。但或许,没有做过定量PCR的师弟或者师妹,并不会了解到,整理结果数据,是一件繁杂和痛苦的事情。
近期,硕士课题组的师兄和师妹希望能有一个相对便捷的,整理qPCR结果的工具,恰好家里网络出了点问题,我便随手写了一个。
小工具的使用
输入数据
需要的输入数据,只有三列,用制表符分隔,用户可以用Excel整理成以下形式,并另存为文本文件,或者直接新建一个txt文件,并黏贴进去后保存。
数据说明:
- 第一行是标题行,可以省略
- 第一列是样本名称
- 第二列是看家基因的Ct值(比如Actin的...)
- 第三列是关注的基因的Ct值
- 示例数据中,每个样本是三个重复,而实际上可以无限个重复
- 重复可以不放在相邻的行
注意,第一个样本,将会作为Control,亦即,可以预计,其计算结果为1
使用工具
打开工具
拖拽或者通过摁钮选择,设置输入文件
设置一个输出文件路径
点击Start即可得到结果
结果解读
如上图,结果文件中:
- 第一行为标题行
- 第一列为样本信息
- 第三列为相对表达量均值
- 第四列为标准差
直接输出图片
顺手把可视化的也写上,毕竟用Excel加个误差棒还是有点麻烦。
写一个没人写的,顺手加上一些可视化的功能,这样就有种闭环的感觉。
写在后面
很久很久没有更新了,主要原因是....暂时没有发现特别有用的,尤其是对我自己有用的功能。当然,课题组主要做实验的朋友,似乎也不需要新的什么工具。
课题课题....还是要继续想办法。