HE染色法的原理及步骤

HE染色原理

HE 染色法为苏木精-伊红染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一，也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。

属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率，在光镜下呈现出细胞图像。

HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外，还有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。

实验步骤

1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。

2、样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

3、染核：苏木素染液染色2－3min，自来水洗涤。

4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

5、染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。

实验相关用品

1、固定液：常用95％乙醇和冰丙酮

2、苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。

3、伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。

4、稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％盐酸。

5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

实验结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

HE染色试剂盒常见规格为310ml和3100lm。

本篇文章转自生化试剂。