第一种写法：

!/usr/bin/python

表示写死了就是要 /usr/bin/python 这个目录下 python 来执行你的脚本。
第二种写法：

!/usr/bin/env

这种写法在你机器上安装了多个版本的python的时候有意义，这样声明的时候，会去取你机器的 PATH 中指定的第一个 python 来执行你的脚本。如果这时候你又配置了虚拟环境的话，那么这样写可以保证脚本会使用你虚拟环境中的 python 来执行。
所以这样看来，只有第二种方法才是正确的写法。

注：写在脚本的第一行。