一、概念
胎牛血清是通过母牛剖腹产胎牛心脏密闭穿刺采血获得的新鲜胎牛全血,经自然层析、离心后收集得到去除血细胞、纤维蛋白等成分的淡黄色透明上清液体,后经生产使用多级高置流膜过滤技术和三级 0.1µm 终端微滤方法处理后,常用于细胞培养相关实验。
二、胎牛血清的作用
胎牛血清是细胞培养中常用的天然培养基,因为胎牛未进食过母乳,所以IgG 含量低,且含有丰富的细胞生长必须的营养成份,故目前多数实验人员选择的都是胎牛血清进行动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
1) 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2) 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3) 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4) 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5)起酸碱度缓冲液作用。
6) 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
三、胎牛血清的储存
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。
我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
二、如何避免胎牛血清沉淀的产生
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。