第一次自己做化转,虽然转的是空载进感受态细胞,但也是胆战心惊,不知道能否成功,向来马虎的我每一步做的都很细致认真,按照实验操作步骤慢慢来,然而第二天早上来看我的抗性平板,长成了这个鬼样子,害怕不成功的我居然做成功了!虽然有点密集。。。。
回顾一下实验操作步骤,由于质粒是购买的,2ug质粒干粉,离心后加入20ulddH2O,终浓度为0.1ug/ul,也就是100ng/ul。首先将2ul,即200ng质粒加入到100ul感受态细胞中,枪头轻轻混匀,冰上静置30min。42℃水浴热激45s,冰上冷却2~3min。加入LB900ul无抗LB复苏,液培1h(220rpm)。涂Amp+抗性平板12~16h。
次日将长出的单克隆挑出,在Amp+抗性平板上划线(可保留一个月),用10ml含有Amp+的玻璃试管LB培养基摇菌,用于质粒提取实验。