【准备】
试剂盒提前复温rt
样品（细胞上清为例）：1000g，20min
【一】样品准备&配标准品
样品离心时即可进行，先准备7个EP管（做好顺序标记，7号管为空白）
标准品粉末 1000g 1min（使所有粉末沉底）
标准品溶解液 1mL 溶解，静置 10min ，轻轻摇晃
7个EP管各加 500 μL 标准品溶解液
从标准品吸取500 μL至 1号EP管，震荡均匀，再从1号吸 500 μL 到 2号管，以此类推
7号管为空白，不加
【二】
（1）加样100 μL/孔（梯度标准品 和 样品）
（2）盖封口膜，37℃ 80min
【三】
上一步结束前15min 配Washing Buffer 和 生物素结合抗体Bio-Ab
（1）甩掉孔内液体
（2）每孔 200 μL Washing Buffer，静置1~2min，甩掉，拍干。【共3次】
（3）100 μL/孔 Bio-Ab
（4）盖封口膜，37℃ 50min
【四】
上一步结束前15min 配 链亲霉素结合HRP（Avi-HRP）
（1）甩干，洗3次
（2）100 μL/孔 Avi-HRP
（3）盖封口膜，37℃ 50min
【五】底物显色
（1）甩干，洗5次
（2）90 μL TMB底物/孔，避光37℃ 20min
（3）50 μL 终止液/孔，轻轻拍打板子边缘几下以混合
【六】上机
注意擦拭干净板底，不要有水渍和指纹
液面不要有气泡
450nm波长，no lid
