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通过align import senqunce导入需要的测序后的报告序列
image.png
可以看到与野生型ubi对比,测序返回的ubi没有问题,完全匹配。K48只有48位的lys(AAG)变为了精氨酸(AGG),K63只有63位的lys(AAG)变为了精氨酸(AGG),所以这是两个只有K48, K63点位突变的ubi,就是K48R and K63R (精氨酸:R)。
正常是什么样子
下图可以看到,正常情况下,其实野生型ubi上是有很多Lys的。
野生型ubi
下图可以看到,K48不突变的ubi,其实是只有K48位的lys不突变,而其它位置的lys都发生了突变。反之,K48突变的ubi(K48R)就是只有K48位点发生了突变,别的位置不突变(K48R见上图)。
K48不突变
K63也是一样。K63不突变的ubi,只有K63位的lys不突变,而其它位置的lys都发生了突变。反之,K63突变的ubi(K63R)就是只有K63位点发生了突变,别的位置不突变(K63R见上图)。
K63不突变
所以,以K48为例,在实验中,做IP拉K48相关蛋白检测的就是发生K48泛素化的蛋白;做IP拉K48R相关蛋白时,就不会把发生K48泛素化的蛋白拉下来(反向验证)