细胞培养（cellculture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

细胞培养也可以称为叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个克隆的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。

细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

细胞培养不是一个简单的操作，在这其中我们需要极其严谨的去应对，也许稍有不慎就会在某一个环节上出错导致后续培养失败。

那我们应该注意哪些方面呢？下文就先为大家介绍到影响培养的一系列因素。

一、影响细胞培养的环境因素有哪些：

　　1．无菌环境

　　无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

　　常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。

　　2.合适的温度

　　一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。

　　3.适宜的渗透压

　　高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。

　　4．气体环境与pH

　　细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。

二、个人因素

1）必须身穿白大褂进入细胞培养间，禁止穿着易起静电及易吸附灰尘的衣物。

2）白大褂的袖口已经扎紧。

3）实验开始前需确定戴的手套没有问题，如果接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

三、实验过程注意

1)进入细胞培养间后关好门，坐下来后尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。

2)工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。需严格检查所用的器材、溶液和细胞，禁止把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。6）确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

3)尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（ps:不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

4)操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

5)细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

6)瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

四、最后一定防止细胞的交叉污染，所有器械试剂全部按区域划分清楚，最好作上标记便于辨别。

1）按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。2）粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口。

3）所有细胞已经购买到货必须及时保种冻存。

（如果发生污染可重新复苏细胞继续培养）