1. 细菌 Cas9 的原理
(1) 原始状态
cas9_3.png
(2) 改造后的状态
cas9_4.png
(3) 如何编辑 genomic DNA
cas9_5.png
其中 依赖DNA Binding Proteins 的技术有：
DNA_BP.png
蛋白特异性结合DNA后，
(4) 基因操作技术
- DNA 测序
- 限制性内切酶
- PCR
- Genome editing
(5) CRISPR-Cas9 技术
cas9_6.png
(6) Genome editing using CRISPR-Cas9
genome_editing.png
蓝色是自己设计的20bp的gRNA序列；
而切割位点在NGG的上游某个位置，_-20bp之间。
- 细菌中，Cas9蛋白精确的平端切割位点位于PAM上游3个核苷酸位置，形成平末端产物。
有两种修复切口的方法：
- 自然修复
-
提供一个外源 template DNA序列，两端和切口配对，中间靠DNA修复机制。
insertion.png
切口位置：
cut_site.png
(7) CRISPR-Cas as a genome editing toolbox
toolbox.png
主要有2个使用方法：
- 基因编辑
- DNA结合蛋白，用于操纵基因组：把切割domain替换为其他分子，
- 比如启动子来做过表达，
- GFP来定位基因组三维结构。
2. 一个植物敲除的例子
一个载体上2个gRNA的例子。
cas9_1.png
cas9_2.png
3. 更多研究
(1) Testing in vivo editing using SaCas9
几乎每种微生物都有自己的Cas9版本，大小和序列都不一样。
切割效率也不一样。体内测试切割效率。
SaCas9.png
(2) CRISPR 系统的分类
Cas9_classes.png
(3) 如果编辑RNA呢？
edit_RNA.png
