热启动Taq酶的常见问题看这篇就够了!

        关于热启动Taq酶,大家还有很多想要了解的方面,小编搜集了一些同学的问题,相信这些答案能帮助很多科研小伙伴更加了解热启动Taq酶哦~


图1.  Taq DNA聚合酶的三维结构

问题一:我的样本是肿瘤细胞,可以试试热启动Taq酶吗?

        可以。诸如来源于肿瘤、土壤、粪便、血液等困难DNA片段的扩增对Taq酶的特异性要求很高。若使用普通Taq酶进行PCR反应很容易导致假阳性结果,因为Taq酶的最适温度为72℃,此时活性最佳,低于这个温度时,仍会有较低的活性,极易错配或形成引物二聚体,尤其是当设计的引物3’端是G或C,错配的链很难重新解开。而经过了化学修饰、配体法修饰或抗体法修饰的热启动Taq酶可以避免在加样、升温等阶段容易出现的非特异扩增和引物二聚体产生,大幅提升了反应的特异性。像一些国外品牌ABI、Takara,国内的Starvio等等,都具有特异性不错的热启动Taq酶产品。就本实验室经验来谈,与经过抗体封闭的热启动Taq酶相比,StarvioHC热启动酶的活性封闭更为彻底,反应特异性也更高,配套的反应缓冲液经多次优化,能有效抵御复杂样本种杂质的干扰,特别适合从复杂的DNA样本中(肿瘤组织、血液等)扩增低拷贝基因。

问题二:我要做qPCR,但是目标基因丰度很低,可以使用热启动Taq酶吗?

        当然可以!低丰度的靶分子往往被其他DNA分子所淹没,从而影响PCR反应的效率和产量。热启动Taq酶可以提高PCR反应的特异性和灵敏性,从而可以输出更多的目的片段。市面上不乏高灵敏度的热启动Taq酶产品,不用考虑经费问题,可以选择Thermo

        Fisher Scientific的Dream Taq热启动DNA聚合酶,可扩增低至3pg的人基因组DNA;但想要性价比高,并且灵敏度更高的可使用Starvio热启动酶,据实验数据,每反应体积能够检测的最低量可达2pg人基因组DNA。

问题三:我想检测泌尿生殖道支原体、衣原体感染,需要进行多重PCR,有好用的热启动Taq酶推荐吗?

        有的。可以支持多重PCR的热启动Taq酶对酶动力要求很高,这个根据您的实验经费来,充足的话可以看看英国Bioline公司的热启动Taq酶(lmmulase)酶动力较好,可做4重PCR,等量起始模板CT30时的荧光信号值最高。目前国内能够支持多重PCR的热启动Taq酶并不多,我们实验室曾经使用Starvio热启动酶检测过泌尿生殖道支原体、衣原体感染,如图所示,扩增曲线典型,酶动力强劲,很适合于多重基因检测。值得一提的是,Starvio热启动酶支持四重以内的PCR检测哦,而且性价比很高,不妨一试!


图2. 使用Starvio热启动酶检测泌尿生殖道支原体、衣原体感染。1为支原体扩增曲线,2为衣原体扩增曲线,3为内参基因扩增。可见,Starvio热启动酶具有灵敏度高,扩增曲线好,酶动力强等优点,很适合于多重基因检测。

问题四:在使用Starvio热启动Taq酶进行PCR反应时,需要注意什么?

        问出这个问题的同学已经是个具备科研素养的科研人了哦~实验的成功除了依靠性能优异的试剂外,还需要各方面因素的加持。我们在使用Starvio热启动Taq酶时,一定要注意以下几点,这样才能获得满意的结果!

1.热启动—热启动Taq酶需要在高温下启动其活性。PCR反应开始前,应将反应混合物95℃加热5分钟。

2.适当混合—反应液体量越少,混合越敏感。应选择适当的管道或反应器,并进行充分混合。

3.模板用量—模板DNA的量并非越多越好,应根据其来源、浓度、纯度、目标片段的丰度等进行调试。

4.热启动Taq酶和引物—实验中引物的设计也非常重要,直接关系结果的好坏,要选择有良好扩增性能的组合,以保证PCR反应的稳定和高效。

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