实验步骤
1.称取0.1g左右的植物组织,放入2ml离心管,加入600ul的DNA提取缓冲液
(Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3)。
2.研磨彻底,65℃水浴50min,中间每隔15分钟颠倒混匀一次。
3.加入600ul的氯仿/异戊醇24:1,颠倒混匀。
4.14000rpm离心10min,取上清液500ul左右到新的1.5ml离心管。
5.加入等体积的异丙醇(约500ul),混匀后放置-20摄氏度,30min。
6.14000rpm,4℃,10min。
7.小心倒掉异丙醇(注意沉淀),加入1ml 75%的乙醇,颠倒混匀,洗涤DNA。
8.14000rpm,离心5min,倒掉75%乙醇。
9.重复步骤8。
10.将DNA沉淀放置于超净台,15min,彻底去除多余的乙醇。
11.加入50-200ul的ddH2O,测浓度,跑电泳,鉴定DNA的质量。
12.置于-20℃,保存。
试剂配制
1.Buffer①(200ml):D-山梨醇-12.754g,Tris pH8.-2 2.42g,EDTANa2-0.3722g。
2.Buffer②(200ml):Tris(pH7.5))4.8456g,EDTANa2-3.722g,NaCl-23.492g,CTAB-4g。
3.Buffer③(200ml):N-月桂酸肌氨酸钠盐-10g。
4.Na2HSO3。
DNA提取缓冲液配制
Buffer①--13.75ml + Buffer②--31.25 ml+ Buffer③--5ml+NaHSO3--0.19g = 50ml DNA提取缓冲液。