12月06日尚恩生物直播课程中，刘老师有关细胞增殖检测常用方法课题给大家做了详细的讲解。
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Q1. 培养基中的酚红会对CCK-8有影响吗？
A：CCK-8于OD450nm波长处显色，实际检测过程中酚红也会有较低的读值，但可以通过空白孔去除本底读数从而实现酚红不影响实验结果。
Q2. CCK8出来的OD值太低没有趋势怎么调整呢？
A：① 提高细胞接种密度，或者增加CCK-8孵育时间，建议先做预实验确认最佳接种密度和孵育时间；② 确认细胞状态是否正常，若细胞状态不佳甚至死亡，建议重新接种状态良好的细胞进行实验；③ 确认药物是否会抑制CCK-8反应，酌情更换不含药物新鲜培养基再进行CCK-8测定。药物若含有金属，抑制CCK-8反应，可能导致OD值过低，掩盖真实的实验结果。可以换成不含药物的培养基，加入CCK-8检测。④ 孵育时间过短，导致反应不完全。可以先做预实验，设立几个不同的时间点，观察溶液颜色变化或上机检测OD值确定恰当的孵育时间。
Q3. 胰酶消化会影响周期检测么？
A：不会，胰酶消化细胞并收集，会对细胞进行PBS清洗，胰酶残留量少，不会影响检测结果。但消化过程中需注意控制胰酶消化时间，消化时间过长或过短都会影响细胞状态，从而影响实验结果。
Q4.EdU检测整个细胞都有信号是怎么回事？
A：洗涤不充分可能导致非特异性染色，使得整个细胞或背景信号过强。在染色后，务必充分洗涤细胞，以去除未结合的EdU和荧光染料，从而减少背景信号。另外，如果没有阳性信号，但是在观察的时候曝光过度，可能会误判为整个细胞都有信号。染色过程中干片也可能导致假阳性。
Q5. EdU检测没有阳性信号是什么原因？
A：可能的原因：① EdU处理时间太短或EdU浓度太低，细胞可能未能充分摄取EdU 。建议预实验摸索最佳条件。② 细胞状态不佳，细胞处于非增殖状态或增殖速率极低，从而无法产生阳性信号。③ 实验条件或操作不当，建议设置阳性对照，仔细检查和调整实验条件，确保符合要求。
