在前几篇推文中，我们详细介绍了不同类型的PCR方法以及如何设计精准的PCR引物。如何选择合适的内参基因也很重要。内参基因是定量PCR（qPCR）中至关重要的一环，用于标准化实验数据，确保不同样本间的可比性和结果的可靠性。
本文将深入探讨在人类、小鼠和大鼠、植物和细菌中，在不同器官和疾病模型下，如何选择最合适的内参基因。
一、人类样本
1.脾脏
(1) 免疫疾病模型（类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮）
推荐内参：B2M、HPRT1
避免使用：GAPDH（免疫细胞代谢活跃，GAPDH易受代谢波动影响）
其他内参建议：
ACTB：细胞骨架在炎症过程中变化较大，不推荐。
18S rRNA：可以使用，适合RNA标准化。
(2) 感染模型（病毒、细菌感染）
推荐内参：18S rRNA、B2M
避免使用：ACTB（感染过程中细胞骨架的变化会影响ACTB的稳定性）
其他内参建议：
GAPDH：代谢在感染过程中波动大，不推荐。
HPRT1：可以使用，通常表现稳定。
(3) 移植排斥模型（器官移植）
推荐内参：B2M、HPRT1
避免使用：GAPDH（免疫排斥反应期间代谢波动显著，GAPDH不稳定）
其他内参建议：
ACTB：排斥反应期间细胞骨架重塑，不推荐。
18S rRNA：适合用于RNA标准化。
2.肝脏
(1) 药物代谢模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（药物代谢显著影响糖代谢，GAPDH表达不稳定）
其他内参建议：
ACTB：与代谢相关实验无显著影响，推荐使用。
B2M：不常用于代谢相关实验，但可作为备用内参。
(2) 脂肪肝、NAFLD模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（脂肪肝和代谢性疾病中，GAPDH参与糖酵解通路，易受代谢变化影响）
其他内参建议：
ACTB：可以使用，较为稳定。
B2M：不常用，但在特定情况下可作为备用。
(3) 肝炎、肝纤维化模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：ACTB（纤维化期间细胞骨架重组，ACTB表达不稳定）
其他内参建议：
GAPDH：肝炎期间代谢变化大，不建议使用。
B2M：可以使用，在炎症条件下表现较稳定。
3.肺
(1) 哮喘模型（慢性气道炎症、过敏反应）
推荐内参：B2M、HPRT1
避免使用：ACTB（气道炎症中细胞骨架重塑，影响ACTB的表达稳定性）
其他内参建议：
GAPDH：在气道炎症期间，代谢活动活跃，不推荐。
18S rRNA：可以使用，适合RNA标准化。
(2) 肺纤维化模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：ACTB（肺纤维化期间细胞结构重塑，影响ACTB表达）
其他内参建议：
GAPDH：代谢波动显著，尤其是纤维化期间，不建议使用。
B2M：适用于肺部免疫反应，可以作为备选内参。
(3) 肺炎、感染模型
推荐内参：B2M、18S rRNA
避免使用：GAPDH（感染期间代谢变化显著，影响其稳定性）
其他内参建议：
ACTB：感染引发的细胞结构变化大，建议避免使用。
HPRT1：适合用于肺炎和感染相关实验。
4.器官:肾脏
(1) 模型1：急性肾损伤（AKI）模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（AKI过程中代谢重塑，GAPDH表达波动大）
其他内参建议：
ACTB：肾脏损伤后细胞骨架变化，建议避免。
B2M：在肾脏免疫反应中表现稳定，可以使用。
(2) 模型2：慢性肾病（CKD）模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（CKD中代谢失衡影响GAPDH表达）
其他内参建议：
ACTB：可以使用，肾病过程中稳定。
B2M：可作为备选，尤其在免疫相关条件下使用。
二、小鼠和大鼠样本
1.脾脏
(1) 免疫接种模型
推荐内参：B2M、HPRT1
避免使用：GAPDH（免疫细胞活跃时代谢波动大，影响其稳定性）
其他内参建议：
ACTB：免疫反应期间细胞骨架重塑，不推荐。
18S rRNA：RNA标准化较好，适用。
(2) 细菌或病毒感染模型
推荐内参：18S rRNA、B2M
避免使用：ACTB（感染导致的细胞骨架变化会影响ACTB表达）
其他内参建议：
GAPDH：感染期间代谢变化显著，不建议使用。
HPRT1：适合在感染过程中稳定表达。
(3) 自体免疫疾病模型
推荐内参：HPRT1、B2M
避免使用：GAPDH（自体免疫反应过程中代谢波动影响GAPDH稳定性）
其他内参建议：
ACTB：自体免疫疾病中免疫细胞活跃，不推荐。
18S rRNA：RNA标准化良好，适用。
2.肝脏
(1) 非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（代谢活跃期间，GAPDH的表达容易受影响）
其他内参建议：
ACTB：可以使用，适合用于稳定表达的实验。
B2M：不常用于代谢相关实验，但可备选。
(2) 药物代谢模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（药物代谢过程中，糖酵解相关基因表达不稳定）
其他内参建议：
ACTB：代谢实验中可使用。
B2M：备选内参。
(3) 肝纤维化模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：ACTB（纤维化过程中，细胞骨架变化显著，影响ACTB表达）
其他内参建议：
GAPDH：代谢波动大，不建议。
B2M：炎症和纤维化过程中表现稳定，可使用。
3.肺
(1) 肺纤维化模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：ACTB（纤维化过程中，细胞结构重塑会干扰ACTB稳定性）
其他内参建议：
GAPDH：代谢变化显著，不推荐。
B2M：适合在免疫和炎症相关研究中使用。
(2) 哮喘模型
推荐内参：B2M、HPRT1
避免使用：ACTB（气道炎症和细胞骨架重塑影响其稳定性）
其他内参建议：
GAPDH：代谢波动显著，哮喘模型中不建议使用。
18S rRNA：可用于RNA标准化。
(3) 感染性肺炎模型
推荐内参：B2M、18S rRNA
避免使用：GAPDH（感染期间代谢变化显著，影响其表达）
其他内参建议：
ACTB：感染导致细胞骨架变化，不建议使用。
HPRT1：在感染模型中表现稳定。
4.肾脏
(1) 急性肾损伤（AKI）模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（AKI导致肾脏代谢紊乱，影响GAPDH稳定性）
其他内参建议：
ACTB：可以使用，但在损伤后细胞骨架可能重塑。
B2M：在免疫反应期间表现较好。
(2) 慢性肾病（CKD）模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：GAPDH（CKD导致代谢异常，影响GAPDH的稳定性）
其他内参建议：
ACTB：可以使用，适合慢性肾病模型。
B2M：可备选，尤其在免疫相关条件下。
(3) 肾小球肾炎模型
推荐内参：HPRT1、18S rRNA
避免使用：ACTB（肾炎引起细胞骨架变化，影响ACTB表达）
其他内参建议：
GAPDH：不建议，代谢紊乱会影响其稳定性。
B2M：可以使用，适合炎症和免疫反应模型。
5.心脏
(1) 心肌梗死模型
推荐内参：ACTB、18S rRNA
避免使用：GAPDH（心肌损伤导致能量代谢剧烈变化，影响GAPDH表达）
其他内参建议：
B2M：不常用于心脏，但可以作为备用。
HPRT1：适合在心肌梗死模型中使用。
(2) 心力衰竭模型
推荐内参：ACTB、HPRT1
避免使用：GAPDH（心衰时代谢重编程，GAPDH表达波动大）
其他内参建议：
18S rRNA：适合RNA标准化。
B2M：可以使用，但不常用于心脏模型。
三、植物样本
1. 器官：叶片、根部、茎
(1) 干旱胁迫模型
推荐内参：EF1α、UBQ
避免使用：TUB（干旱胁迫期间细胞骨架不稳定，影响TUB表达）
其他内参建议：
18SrRNA：可以使用，适合用于RNA标准化。
GAPDH：不推荐，代谢变化显著。
(2) 盐胁迫模型
推荐内参：EF1α、UBQ
避免使用：TUB（细胞骨架在盐胁迫下可能发生变化，影响TUB稳定性）
其他内参建议：
18S rRNA：可作为RNA标准化的内参。
GAPDH：盐胁迫期间代谢变化显著，影响表达稳定性，不建议使用。
四、细菌样本
1. 常规生长条件
推荐内参：16S rRNA、recA
避免使用：gyrA（在某些应激条件下，gyrA可能受到调控影响）
其他内参建议：
rpoB：可以使用，在基因表达标准化中表现稳定。
2. 应激反应模型
推荐内参：recA、16S rRNA
避免使用：gyrA（在极端应激下，gyrA的表达可能变化）
其他内参建议：
rpoB：适合在应激反应条件下使用。
END! 本期先到这里啦，下期更精彩！
