“Lactucopicrin Inhibits Cytoplasmic Dynein-Mediated NF-kB Activation in Inflammated Macrophages and Alleviates Atherogenesis in Apolipoprotein E-Deficient Mice”
Key words: Lactucopicrin；Dynein；NF-kB activation； Inflammated macrophages；Atherogenesis
文章简介
①发表期刊：2021年1月22日发表于《Molecular Nutrition & Food Research》，JCR分区：Q1，IF=5.309
②原文链接：He L, Weng H, Li Q, Shi G, Liu X, Du Y, Zheng J, Ling W, Wang D. Lactucopicrin Inhibits Cytoplasmic Dynein-Mediated NF-κB Activation in Inflammated Macrophages and Alleviates Atherogenesis in Apolipoprotein E-Deficient Mice. Mol Nutr Food Res. 2021 Feb;65(4):e2000989. doi: 10.1002/mnfr.202000989. Epub 2021 Jan 22. PMID: 33377310.
研究背景
动脉粥样硬化（AS）性心血管疾病作为全球人口死亡的重大疾病之一，其发病常与营养膳食不均密切相关。因此，人们通过摄入可降低AS发病风险的含非营养素成分的果蔬来防控AS的发生、发展。
有研究证实，巨噬细胞炎症是AS发病的重要因素，且受NF-kB(p50、p65亚基)异二聚体调控。在休眠期的巨噬细胞中，胞浆中的NF-kB与其抑制剂IkBα结合，但当巨噬细胞遭受促炎因子刺激时，IkB激酶（IKK）被激活，进而使IkBα磷酸化，导致IkBα发生泛素化及蛋白酶体降解；NF-kB被释放后，NF-kB核定位序列暴露，由胞浆动力蛋白Dynein将NF-kB以负极运动方向运输至胞质蛋白importin-𝛼5上，importin-𝛼5护送NF-kB从胞质向核内转移，启动多个基因的转录，例如促炎因子IL-1β、TNF-α的表达，那么，抑制巨噬细胞中NF-kB激活可能是治疗AS的潜在途径。倍半萜类化合物山莴苣苦素（Lactucopicrin，LCP）作为一种分布于菊科蔬菜生菜、菊科药用植物菊苣中的苦味物质，具抗疟、抗癌、镇痛镇静等药理活性，但其对AS的影响未见报道。故中山大学公共卫生院王冬亮教授团队基于RAW264.7巨噬细胞模型和ApoE基因敲除小鼠模型探讨LCP对AS的影响及功能机制。
科学问题
LCP是否具有抗动脉粥样硬化作用？其发挥功能的分子机制是怎样的？
技术路线
To evaluate the impact of lactucopicrin on macrophage inflammation and theformation of early atherosclerosis.
Results
①Lactucopicrin Reduces NF-𝜿BActivities in Inflammated Macrophages.
②Lactucopicrin does not Modulate the Upstream Components of the Canonical NF-𝜿B Pathway and NF-𝜿B/p65 DNA Binding Activity in Inflammated Macrophages.
③Lactucopicr inInhibits p65 Nuclear Translocation in Inflammated Macrophages.
④Lactucopicr inInhibits p65 Nuclear Translocation by Down regulation of Cytoplasmic Dynein-Mediated Transport of p65 in Inflammated Macrophages.
⑤Lactucopicr inInhibits Early Atherosclerosis Formation in ApoE–/–Mice.
⑥Lactucopicrin Reduces NF-𝜿B Activities in Macrophages within Atherosclerotic Plaques in ApoE–/–Mice.
三人行必有我师焉
小知识汇总啦！！！
1）NF-kB同源/异源二聚体，由两类亚基组成，分别是：①p65(Rel A)、RelB、c-Rel；②p50、p52，常见组成：p65/p50，p65/p65；
2）BMDMs分离于8周龄C57BL/6J小鼠；
3）DTT：二硫苏糖醇，是巯基化DNA的还原剂和去保护剂，可降低DNA的二聚化，裂解蛋白质分子间的二硫键，在本研究中作为一种蛋白烷基化抑制剂；
4）In Vitro Toxicity Assay Kit (Sigma–Aldrich)：检测细胞培养上清；
5）Luciferase Reporter Assay：pNF-𝜅B luciferase reporter vectors 和 internal
control of Renilla-luciferase reporter vectors构建，经细胞转染试剂Lipofectamine 2000 reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA)转染至BMDMs，24h后，细胞裂解，由Dual-Luciferase Reporter Assay kit (Promega)检测NF-𝜅B活性；
6）whole-cell, cytoplasmic, or nuclear lysates were
isolated using a Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction kit (Thermo Fisher Scientific)；
7）𝛽-Actin常作为胞质蛋白内参，histone H3 作为核蛋白的内参；
8）RT-qPCR试剂盒三件套：①RNA提取（RNeasy Kits(Qiagen, Hilden, Germany)；②反转录（SuperScript III kit (Invitrogen) using random primers）；③荧光探针标记（iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad, Hercules, CA)；注：常以gapdh基因作内参；
9）炎症因子ELISA试剂盒：IL-1𝛽 (MHSLB00), TNF-𝛼 (MTA00B), IL-6 (M6000B) quantitative ELISA kits
(R&D Systems, Minneapolis, MN)；
10）DNA-Binding Activity of Nuclear p65：TransAM
NF-𝜅B p65 ELISA kit (Active Motif, Carlsbad, CA)；
11）抗体订购：CD68(rat, 14–0681-82, Invitrogen),F4/80(rabbit, ab100790, Abcam),NF-𝜅B/p65(rabbit, ab16502, Abcam), orIL-1𝛽 (rabbit, ab9722, Abcam)，AlexaFluor 647 anti-rat IgG (Invitrogen) orAlexa Fluor 488 anti-rabbit IgG(Invitrogen)
12）血清总胆固醇及甘油三酯检测：commercial enzyme kits (Applygen, Beijing, China)。
寻寻觅觅，彼此共成长，我们继续看世界！
