植物样本做WB,想要获得稳定的条带,前面的样本处理非常重要。
首先使用PBS快速清洗龙葵样本,去除表面杂质,减少后续实验干扰。 清洗后进行离心,尽量去除残留PBS。
如果离心后发现还有较多液体残留,可以适当增加离心转速和时间,让样本状态更加适合后续裂解。
由于植物细胞壁结构比较特殊,需要充分破碎才能提高蛋白释放效率。”
加入艾克预混裂解液,预先配置多种保护成分,无需额外添加,再加入钢珠辅助研磨,让组织充分破碎。
研磨完成后,将样本放置冰上裂解10分钟,让蛋白充分释放,同时降低蛋白降解风险。 裂解完成后离心取上清,可以进行BCA蛋白定量。
如果蛋白浓度合适,也可以直接加入Loading Buffer,进入后续WB实验。
现在又一小时完成WB实验,包含15分钟电泳,15分钟转膜,15分钟内参显色