故事起始于 1945 年，彼时的世界局势风云变幻，第二次世界大战已近尾声，但日军仍在负隅顽抗，妄图通过残忍且反人类的手段扭转战局。在我国东北哈尔滨平房区，关东军第七三一防疫给水部队，这个披着医学研究外衣，实则是人间炼狱的魔窟，正紧锣密鼓地开展着细菌战研究计划，代号为 “夜晚的樱”。他们将无辜百姓、战俘等视作 “马路大”，即实验材料，进行着令人发指的人体实验，手段之残忍、行径之暴虐，突破了人类良知的底线。
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影片从一个小人物的视角切入这段沉重的历史。姜武饰演的角色是一名普通的中国劳工，原本过着平凡的生活，却在战争的阴霾下，不幸被 部队抓捕，从此陷入了无尽的黑暗深渊。刚被押送至 部队驻地时，他便被眼前的景象所震惊。这里四处弥漫着死亡的气息，被关押在狭小牢房里的人们，眼神空洞，身体因饥饿和折磨而极度虚弱，他们的生命在这里如同蝼蚁般被随意践踏。劳工被安排在焚尸炉前工作，每天都要搬运大量同胞的尸体。那些尸体，有的残缺不全，有的布满了恐怖的伤痕，每一次搬运，都像是在他心上狠狠地划了一刀，让他对日军的仇恨愈发浓烈。
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在 部队内部，有着森严的等级制度和复杂的权力斗争。王志文饰演的军医，是 部队中的核心人物之一。他为了所谓的 “科学研究” 和晋升机会，彻底沦为了战争的帮凶，丧失了基本的人性。他主导并参与了多项惨无人道的人体实验，如冻伤实验。在寒冷的冬天，日军将受害者带到室外，把他们的手脚暴露在严寒中，直至肢体被冻僵，然后再用热水浇灌，观察肢体的变化。受害者们痛苦的惨叫声回荡在实验室里，而这位军医却在一旁冷漠地记录着数据，仿佛眼前遭受折磨的不是活生生的人，而是毫无感情的实验品。还有细菌感染实验，日军将鼠疫、霍乱等致命细菌注射到受害者体内，观察他们从感染到发病直至死亡的全过程，详细记录下每一个症状变化。许多受害者在痛苦中挣扎，身体逐渐被病魔侵蚀，最终悲惨地死去。
除了这些残忍的实验， 部队还进行着更加疯狂的计划 —— 研制细菌武器。他们妄图通过细菌弹、细菌战等方式，对无辜平民进行大规模屠杀，以达到其不可告人的政治目的。在研制过程中，他们不断改进细菌的毒性和传播方式，全然不顾这些武器将给人类带来的巨大灾难。而这一切，都建立在无数无辜生命的牺牲之上。
面对日军的残暴行径，被关押在 部队的人们并未完全屈服。他们在绝境中相互扶持，寻找着生存的希望，同时也在隐秘地进行着抗争。劳工和一些被实验者暗中策划，试图破坏 部队的实验设施，揭露他们的罪行。他们利用在实验室工作的机会，偷偷收集实验数据和罪证，寻找时机传递出去。尽管每一次行动都面临着巨大的风险，一旦被发现，必将遭受残酷的惩罚，但他们为了正义，为了让更多的人了解 部队的罪恶，毅然决然地选择了抗争。
在影片中，还穿插着一些 部队内部人员的人性挣扎。有些士兵和军医，在目睹了太多的残忍实验后，内心开始产生动摇。他们虽然身处战争的漩涡中，受到军国主义思想的洗脑，但在人性的深处，依然残留着一丝良知。然而，在部队的高压统治和战争的大环境下，他们的挣扎显得那么无力。有的选择默默忍受，有的则在痛苦中逐渐沉沦，最终成为了战争的牺牲品。
随着战争局势的逐渐明朗，日军在各个战场节节败退， 部队也意识到自己的末日即将来临。为了掩盖罪行，他们开始疯狂地销毁实验资料，杀害所有还活着的 “马路大”。他们将实验基地付之一炬，妄图让一切罪恶都随着大火灰飞烟灭。但他们的阴谋并未得逞，一些被实验者和正义之士，凭借着顽强的意志和无畏的勇气，成功地保存了部分罪证，并将其传递出去。这些罪证成为了日后揭露 部队罪行的关键证据，让全世界都看清了日军的丑恶嘴脸。
