1933 年，日本军国主义的野心急剧膨胀，妄图通过惨无人道的手段扭转战争局势。在中国东北的哈尔滨平房区，一支恶魔般的部队 —— 关东军第七三一防疫给水部队，即臭名昭著的 部队秘密组建。表面上，这里是普通的军事驻地，四方楼内却暗藏着无数罪恶的深渊，一场场令人发指的细菌实验在此悄然展开。
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影片伊始，年轻的中国抗日志士陈宇（张家辉饰）不幸落入日军魔掌，被押送到 部队的监狱。踏入监狱的瞬间，压抑与恐怖的气息扑面而来。囚犯们被折磨得奄奄一息，日军士兵如恶魔般挥舞着皮鞭，呵斥声、惨叫声交织回荡，仿佛置身于无间地狱。陈宇还未从震惊中缓过神，便被无情地拖入细菌实验的漩涡。
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日军为了测试细菌武器的杀伤力，进行了各种灭绝人性的实验。他们将活人当作随意摆弄的 “马路大”（实验品），随意挑选囚犯。在毫无麻醉的情况下，将带有鼠疫、霍乱、伤寒等致命病菌的注射器刺入他们的身体，冷漠地观察病菌在人体中的扩散过程。被实验者身体迅速出现各种症状，高烧、呕吐、抽搐，痛苦不堪，却得不到丝毫救治，只能在绝望中等待死亡降临。有一位年轻的母亲，在被注射病菌后，看着自己年幼的孩子，眼中满是不舍与绝望，却无力反抗，最终在痛苦中咽下了最后一口气，孩子在一旁撕心裂肺地哭喊，却也难逃被当作实验品的命运。
在冻伤实验区，零下数十度的严寒成为日军的帮凶。他们强迫囚犯将双手或双脚浸泡在冰水中，直至肢体完全冻僵，然后再用热水浇灌，观察肢体的解冻反应。有的囚犯四肢皮肤脱落，露出森森白骨，痛苦的哭喊声回荡在实验室内，而日军军医却在一旁冷漠地记录着数据，仿佛这些囚犯不是鲜活的生命，而是毫无感情的实验道具。一位原本健壮的年轻人，在经历冻伤实验后，四肢严重残疾，余生只能在无尽的痛苦中度过，他的眼神中充满了对日军的仇恨和对命运的不甘。
还有那残忍至极的活体解剖实验。日军将囚犯直接绑在手术台上，不打麻药便持刀剖开胸膛，观察人体器官在鲜活状态下的运作，甚至将还在跳动的心脏取出进行研究。囚犯们在清醒状态下承受着巨大的痛苦，眼神中充满了恐惧与绝望，而这一切在日军眼中只是一场 “科学研究”。在一次活体解剖中，一位勇敢的抗日志士在手术台上仍对日军破口大骂，他用最后的力气表达着对侵略者的愤怒，可最终还是倒在了日军冰冷的手术刀下。
陈宇也未能幸免，他被选中参与了多次实验，身体遭受了极大的创伤。但在这地狱般的环境中，他的意志却愈发坚定。他深知，自己不能就这样默默死去，必须想办法揭露 部队的罪行，为同胞们报仇雪恨。在监狱中，他结识了其他受害者，有来自中国各地的抗日志士，也有被抓来的无辜百姓，还有苏联、朝鲜等国际战俘。他们虽然国籍不同、身份各异，但都有着共同的敌人 —— 残暴的日军。其中，有一位名叫安德烈的苏联战俘，他原本是一名优秀的飞行员，在一次空战中不幸被俘。他性格坚毅，与陈宇很快成为了挚友，两人相互鼓励，共同寻找逃离的机会。
众人在暗中开始策划抵抗行动。曾是医生的囚犯林浩利用自己的专业知识，偷偷绘制 部队的布局图，标记出各个实验区域的位置以及日军的巡逻规律。还有人负责收集实验数据，这些数据将成为日后揭露日军罪行的铁证。陈宇凭借着自己的机智与勇敢，在日军的严密监视下，与外界取得了微弱的联系，传递出一些关于 部队的情报。他们通过在监狱外的隐秘角落留下暗号，与潜伏在附近的抗日组织取得沟通，尽管每次传递情报都冒着极大的风险，但他们从未放弃。
然而，日军也察觉到了囚犯们的异样，加强了戒备。他们开始频繁处决囚犯，以震慑反抗的力量。在一次大规模的处决行动中，陈宇亲眼目睹了许多战友被残忍杀害，心中的仇恨之火燃烧得更加旺盛。但这也让他明白，时间紧迫，必须加快抵抗计划的实施。在处决现场，日军将囚犯们排成一排，用机枪疯狂扫射，鲜血染红了大地，陈宇看着战友们一个个倒下，泪水模糊了双眼，他暗暗发誓，一定要让这些侵略者付出代价。
此时， 部队内部也并非铁板一块。日军军医们为了争夺资源和晋升机会，明争暗斗不断。一位年轻的日本军医山本（李乃文饰），在目睹了太多惨无人道的实验后，内心开始产生动摇。他对自己参与的这些反人类罪行感到愧疚，对上级的命令也不再盲目服从。陈宇敏锐地察觉到了这一点，试图与他沟通，希望他能成为抵抗行动的内应。起初，山本十分犹豫，他害怕背叛上级会带来严重的后果。但在陈宇的不断劝说下，以及内心良知的谴责下，他最终决定帮助囚犯们。山本利用自己的职务之便，为囚犯们提供了一些关键物资，如药品、工具等，还偷偷为他们传递一些日军内部的重要消息。
在山本的帮助下，囚犯们获得了一些关键物资，这为他们的抵抗行动提供了极大的支持。他们计划在日军进行一次大规模细菌武器测试时，破坏实验设施，引发混乱，然后趁机逃离。行动当天，所有人都绷紧了神经，按照计划有条不紊地进行。负责破坏设施的人员成功潜入实验区，安装了炸药。然而，就在即将引爆炸药时，一名日军士兵发现了异常，警报声瞬间响起。
日军迅速出动，对囚犯们进行围追堵截。一时间，监狱内枪声大作，火光冲天。陈宇带领着其他囚犯，在枪林弹雨中奋力突围。他们与日军展开了激烈的搏斗，有人在战斗中不幸牺牲，但没有人退缩。在混乱中，陈宇等人终于找到了机会，冲向了监狱的大门。然而，大门紧闭，日军在门外早已设下了重重防线。陈宇心急如焚，他四处寻找开门的方法，同时还要躲避日军的攻击，身边的战友不断倒下，他的心中充满了悲痛和愤怒。
就在众人陷入绝境之时，外界的抗日力量得到了消息，赶来支援。他们与监狱内的囚犯里应外合，对日军发起了猛烈的攻击。经过一番艰苦的战斗，终于突破了日军的防线，打开了监狱大门。陈宇和幸存的囚犯们在抗日力量的掩护下，成功逃离了 部队的魔窟。在逃离的过程中，陈宇紧紧抱着收集到的 部队实验数据和罪证，仿佛那是他生命中最重要的东西，他知道，这些将是揭露日军罪行的关键。
影片结尾，陈宇带着收集到的 部队实验数据和罪证，踏上了揭露日军罪行的道路。他深知，这只是漫长斗争的开始，他要让全世界都知道 部队的暴行，让那些无辜死去的同胞得到安息。而 部队的罪恶历史，也将永远铭刻在人类历史的耻辱柱上，时刻提醒着人们，战争的残酷与和平的珍贵。他每走一步，都仿佛能感受到同胞们的目光在背后注视着他，给予他力量，他将带着这份使命，坚定地走下去，直至真相大白于天下。
