1933 年，日本军国主义野心膨胀，在我国东北哈尔滨平房区秘密组建了关东军第七三一防疫给水部队，即臭名昭著的 部队。四方楼里，细菌实验的阴霾笼罩，无数无辜生命惨遭屠戮，这里成了人间炼狱。
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年轻的中国抗日志士陈宇（张家辉饰）不幸被日军俘虏，押送至 部队的监狱。监狱中，压抑与恐怖弥漫，囚犯们被折磨得奄奄一息，日军的皮鞭与呵斥声交织，仿若无间地狱。陈宇刚踏入，便被无情卷入细菌实验的漩涡。
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日军为测试细菌武器杀伤力，进行了惨无人道的实验。活人沦为 “马路大”（实验品），随意被挑选注射鼠疫、霍乱、伤寒等致命病菌。被实验者痛苦不堪，高烧、呕吐、抽搐，却得不到救治，只能在绝望中等待死亡。一位年轻母亲被注射病菌后，看着年幼孩子，满是不舍与绝望，最终痛苦离世，孩子的哭喊也无法阻止被当作实验品的命运。
在冻伤实验区，日军利用严寒折磨囚犯。他们强迫囚犯将肢体浸泡在冰水中，直至冻僵，再用热水浇灌观察解冻反应。囚犯们四肢皮肤脱落、露出白骨，哭喊声回荡，而日军军医却冷漠记录数据。一位健壮年轻人经历冻伤实验后，四肢残疾，余生在痛苦中度过，眼神满是仇恨与不甘。
活体解剖实验更是残忍至极。日军将囚犯直接绑在手术台，不打麻药便持刀剖开胸膛，观察器官运作，甚至取出跳动的心脏研究。囚犯在清醒中承受剧痛，恐惧与绝望溢于言表，而这在日军眼中只是 “科学研究”。一次活体解剖中，一位抗日志士在手术台上大骂日军，用最后力气表达愤怒，最终倒在冰冷手术刀下。
陈宇也未能幸免，多次被选中参与实验，身体遭受重创，但意志愈发坚定。他深知要揭露 部队罪行，为同胞报仇。在监狱中，他结识了来自中国各地的抗日志士、无辜百姓，以及苏联、朝鲜等国际战俘。大家虽国籍、身份不同，但都对日军恨之入骨。苏联战俘安德烈，原是优秀飞行员，空战被俘后与陈宇结为挚友，两人相互鼓励，寻找逃离机会。
众人暗中策划抵抗行动。曾为医生的囚犯林浩利用专业知识，偷偷绘制 部队布局图，标记实验区域与日军巡逻规律。有人负责收集实验数据，这些将成为揭露日军罪行的铁证。陈宇凭借机智勇敢，在日军监视下与外界取得微弱联系，传递情报。他们在监狱外隐秘角落留下暗号，与潜伏的抗日组织沟通，每次传递情报都冒着极大风险，却从未放弃。
然而，日军察觉囚犯异样，加强戒备，频繁处决囚犯以震慑反抗。一次大规模处决中，陈宇目睹众多战友被杀害，仇恨之火燃烧更旺，也深知时间紧迫，必须加快抵抗计划。处决现场，日军用机枪扫射囚犯，鲜血染红大地，陈宇看着战友倒下，泪水模糊双眼，发誓让侵略者付出代价。
此时， 部队内部并非铁板一块。日军军医山本（李乃文饰），在目睹诸多惨无人道的实验后，内心开始动摇。他对参与的反人类罪行感到愧疚，对上级命令不再盲目服从。陈宇敏锐察觉，试图与他沟通，希望他成为内应。起初，山本犹豫害怕，但在陈宇劝说和良知谴责下，最终决定帮助囚犯。山本利用职务之便，为囚犯提供药品、工具等关键物资，还传递日军内部重要消息。
在山本帮助下，囚犯们获得关键物资，计划在日军大规模细菌武器测试时，破坏实验设施，引发混乱后趁机逃离。行动当天，众人按计划行事，负责破坏设施的人员成功潜入实验区安装炸药。但就在引爆炸药时，一名日军士兵发现异常，警报声响起。
日军迅速围追堵截，监狱内枪声大作、火光冲天。陈宇带领囚犯在枪林弹雨中奋力突围，与日军展开激烈搏斗，有人牺牲却无人退缩。混乱中，陈宇等人冲向监狱大门，却发现大门紧闭，日军在门外设下重重防线。陈宇焦急寻找开门方法，同时躲避攻击，身边战友不断倒下，他悲痛又愤怒。
关键时刻，外界抗日力量赶来支援，与监狱内囚犯里应外合，对日军发起猛烈攻击。经过艰苦战斗，终于突破防线，打开监狱大门。陈宇和幸存囚犯在掩护下成功逃离 部队魔窟。逃离过程中，陈宇紧紧抱着收集的实验数据和罪证，这是揭露日军罪行的关键，他深知责任重大，将带着这份使命坚定前行，直至真相大白于天下。
